| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-29页 |
| 1 马铃薯产业现状概况 | 第10-11页 |
| 2 马铃薯主要病毒介绍 | 第11-17页 |
| 2.1 马铃薯Y病毒 | 第12页 |
| 2.2 马铃薯X病毒 | 第12-13页 |
| 2.3 马铃薯S病毒 | 第13-14页 |
| 2.4 马铃薯A病毒 | 第14页 |
| 2.5 马铃薯M病毒 | 第14页 |
| 2.6 马铃薯卷叶病毒 | 第14-15页 |
| 2.7 中国马铃薯病毒病害的种类及发生分布情况 | 第15-17页 |
| 3 马铃薯病毒检测技术 | 第17-26页 |
| 3.1 生物学检测法 | 第17-18页 |
| 3.2 电子显微镜检测法 | 第18-20页 |
| 3.2.1 电镜负染色检测法 | 第18页 |
| 3.2.2 电镜超薄切片法 | 第18-19页 |
| 3.2.3 免疫电镜检测法 | 第19-20页 |
| 3.3 免疫学检测法 | 第20-22页 |
| 3.3.1 酶联免疫吸附法 | 第20-22页 |
| 3.3.1.1 双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA) | 第20-21页 |
| 3.3.1.2 间接法(I-ELISA) | 第21页 |
| 3.3.1.3 三抗体夹心酶联免疫吸附法(TAS-ELISA) | 第21页 |
| 3.3.1.4 斑点免疫检测法(DOT-ELISA) | 第21页 |
| 3.3.1.5 快速酶联免疫吸附法(快速ELISA) | 第21-22页 |
| 3.3.2 免疫试纸条法 | 第22页 |
| 3.4 分子生物学检测法 | 第22-26页 |
| 3.4.1 核酸杂交技术 | 第22-24页 |
| 3.4.1.1 印迹杂交 | 第23页 |
| 3.4.1.2 斑点杂交 | 第23页 |
| 3.4.1.3 组织印迹杂交 | 第23页 |
| 3.4.1.4 生物芯片 | 第23-24页 |
| 3.4.2 RT-PCR检测技术 | 第24-26页 |
| 3.4.2.1 常规RT-PCR检测技术 | 第24-25页 |
| 3.4.2.2 多重RT-PCR检测技术 | 第25页 |
| 3.4.2.3 荧光竞争RT-PCR检测技术 | 第25-26页 |
| 3.4.2.4 免疫捕获RT-PCR检测技术 | 第26页 |
| 4 检测方法的比较 | 第26-27页 |
| 5 研究目的及意义 | 第27-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-47页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| 1.1 样品来源 | 第29页 |
| 1.2 宿主菌 | 第29页 |
| 1.3 质粒载体 | 第29页 |
| 1.4 各种酶及试剂 | 第29页 |
| 1.5 引物 | 第29-30页 |
| 1.6 主要实验仪器 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-47页 |
| 2.1 电子显微镜检测方法(负染色法) | 第30页 |
| 2.2 酶联免疫吸附测定检测方法 | 第30-32页 |
| 2.2.1 双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA) | 第30-31页 |
| 2.2.2 间接ELISA(I-ELISA) | 第31-32页 |
| 2.3 目的片段的扩增及克隆 | 第32-36页 |
| 2.3.1 植物总RNA的提取 | 第32页 |
| 2.3.2 目的片段的扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.2.1 两步法RT-PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.3 目的片段的克隆 | 第33-36页 |
| 2.3.3.1 PCR产物回收 | 第33-34页 |
| 2.3.3.2 连接 | 第34页 |
| 2.3.3.3 转化 | 第34-35页 |
| 2.3.3.4 阳性克隆的划线培养 | 第35页 |
| 2.3.3.5 阳性克隆的PCR鉴定(菌落PCR) | 第35页 |
| 2.3.3.6 质粒DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.4 原核表达载体的构建 | 第36-39页 |
| 2.4.1 质粒及载体的双酶切及纯化 | 第36-37页 |
| 2.4.2 表达载体的连接 | 第37页 |
| 2.4.3 表达载体的转化 | 第37-38页 |
| 2.4.4 菌落PCR及测序鉴定 | 第38页 |
| 2.4.5 质粒的提取和菌液的保存 | 第38-39页 |
| 2.4.6 表达载体质粒的双酶切鉴定 | 第39页 |
| 2.4.7 转化表达菌 | 第39页 |
| 2.5 目的蛋白的诱导表达 | 第39-40页 |
| 2.6 重组蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第40-41页 |
| 2.7 诱导蛋白的可溶性分析、纯化及复性 | 第41-42页 |
| 2.8 纯化蛋白浓度的测定 | 第42页 |
| 2.9 抗血清的制备 | 第42-43页 |
| 2.10 抗血清效价及工作浓度的测定 | 第43-44页 |
| 2.11 抗血清专化性的测定 | 第44页 |
| 2.12 抗血清灵敏度的測定 | 第44页 |
| 2.13 Western blot鉴定 | 第44-46页 |
| 2.14 检测试剂盒的制备 | 第46页 |
| 2.15 检测试剂盒的ID-ELISA应用 | 第46页 |
| 2.16 试剂盒检测结果的PCR验证 | 第46-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-61页 |
| 1 电子显微镜检测结果 | 第47页 |
| 1.1 马铃薯S病毒 | 第47页 |
| 1.2 马铃薯卷叶病毒 | 第47页 |
| 2 DAS-ELISA检测结果 | 第47-48页 |
| 3 PVS和PLRV cp基因的扩增及克隆 | 第48-49页 |
| 3.1 RT-PCR扩增 | 第48页 |
| 3.2 质粒DNA的提取 | 第48-49页 |
| 4 原核表达载体的构建 | 第49-51页 |
| 4.1 质粒及载体的双酶切 | 第49-50页 |
| 4.2 菌落PCR及测序鉴定 | 第50-51页 |
| 4.3 重组质粒的双酶切鉴定 | 第51页 |
| 5 重组蛋白的诱导表达 | 第51-52页 |
| 6 表达蛋白的Western blot检测鉴定 | 第52-53页 |
| 7 诱导蛋白的可溶性分析 | 第53页 |
| 8 蛋白的纯化及定量 | 第53-54页 |
| 9 抗血清的制备和效价及工作浓度的测定 | 第54-55页 |
| 10 抗血清专化性的测定 | 第55-56页 |
| 11 抗血清灵敏度的测定 | 第56-57页 |
| 12 试剂盒的组装和使用方法及范围 | 第57-58页 |
| 12.1 试剂盒主要成分 | 第57-58页 |
| 12.2 试剂盒使用方法 | 第58页 |
| 12.3 试剂盒适用机构 | 第58页 |
| 13 检测试剂盒的I-ELISA应用 | 第58-59页 |
| 14 试剂盒检测结果的PCR验证 | 第59-61页 |
| 第四章 讨论 | 第61-65页 |
| 1 不同检测方法的比较 | 第61-62页 |
| 2 基因工程技术制备抗血清 | 第62-64页 |
| 2.1 利用cp基因原核表达蛋白制备抗血清 | 第62-63页 |
| 2.2 原核表达蛋白与提纯病毒颗粒制备抗血清的差异 | 第63-64页 |
| 3 检测试剂盒的应用前景 | 第64-65页 |
| 第五章 主要结论 | 第65-66页 |
| 附录Ⅰ Tris-甘氨酸SDS-PAGE不连续电泳不同浓度凝胶配制 | 第66-67页 |
| 附录Ⅱ 主要实验仪器 | 第67-68页 |
| 附录Ⅲ 缩写词及英汉对照 | 第68-69页 |
| 附录Ⅳ 常用试剂的配制 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 硕士研究生期间发表及投稿的论文及获得专利 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
