| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 符号说明 | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-22页 |
| 实验材料与方法 | 第22-38页 |
| 1. 实验材料 | 第22-23页 |
| 1.1 质粒和细胞株 | 第22页 |
| 1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 1.3 主要耗材 | 第23页 |
| 1.4 实验动物 | 第23页 |
| 2. 实验方法 | 第23-38页 |
| 2.1 构建稳转细胞株 | 第23-26页 |
| 2.1.1 构建编码突变型人整合素 β3 的真核表达载体 | 第23页 |
| 2.1.2 细胞转染与稳转细胞株的建立 | 第23-24页 |
| 2.1.3 流式细胞术检测稳转细胞株中 β3 和 αIIb的表达 | 第24页 |
| 2.1.4 蛋白印迹法（Western blot）检测稳转细胞株中整合素 αIIb和 β3 蛋白的表达 | 第24-26页 |
| 2.2 细胞在固相化纤维蛋白原上的黏附及伸展试验 | 第26页 |
| 2.3 蛋白免疫共沉淀（Co-IP）检测稳转细胞株胞内的蛋白质相互作用 | 第26-28页 |
| 2.3.1 Co-IP检测 β3 与kindlin蛋白之间的相互作用 | 第27页 |
| 2.3.2 Co-IP检测 β3 与src之间的相互作用 | 第27-28页 |
| 2.4 纯合子小鼠繁殖与鉴定 | 第28-30页 |
| 2.4.1 纯合子小鼠繁殖 | 第28页 |
| 2.4.2 纯合子小鼠的基因型鉴定 | 第28-30页 |
| 2.5 逆转录病毒的获得 | 第30-33页 |
| 2.5.1 病毒质粒的抽提及测序 | 第30-31页 |
| 2.5.2 逆转录病毒包装及感染效率测定 | 第31-33页 |
| 2.6 小鼠造血干细胞移植 | 第33-35页 |
| 2.6.1 移植前准备 | 第33-34页 |
| 2.6.2 骨髓移植 | 第34-35页 |
| 2.7 流式细胞仪检测转基因小鼠血小板的 β3 及GFP的表达 | 第35页 |
| 2.8 转基因血小板的功能分析 | 第35-37页 |
| 2.8.1 流式细胞仪检测转基因小鼠血小板与游离纤维蛋白原的结合 | 第35-36页 |
| 2.8.2 转基因小鼠血小板在固相化纤维蛋白原的伸展 | 第36-37页 |
| 2.9 统计学分析 | 第37-38页 |
| 实验结果 | 第38-54页 |
| 1. 稳转细胞株的建立 | 第38-40页 |
| 1.1 β3 突变型（β3?NITY）真核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 1.2 流式细胞术检测稳转细胞株中 αIIb和 β3 的表达 | 第39页 |
| 1.3 免疫印迹法检测蛋白的表达 | 第39-40页 |
| 2. 细胞在固相化纤维蛋白原上的黏附及伸展情况 | 第40-42页 |
| 3. Co-IP检测稳转细胞株胞内的蛋白质相互作用 | 第42-43页 |
| 3.1 Co-IP检测 β3 与kindlin蛋白之间的相互作用 | 第42页 |
| 3.2 Co-IP检测 β3 与src之间的相互作用 | 第42-43页 |
| 4. 逆转录病毒感染的造血干细胞移植方法的评估 | 第43-45页 |
| 5. 纯合子小鼠的基因型鉴定 | 第45页 |
| 6. 空载、野生型及突变型整合素 β3 逆转录病毒的获得 | 第45-48页 |
| 6.1 逆转录病毒载体的测序鉴定 | 第45-46页 |
| 6.2 逆转录病毒包装 | 第46-47页 |
| 6.3 逆转录病毒感染效率测定 | 第47-48页 |
| 7. 转基因小鼠血小板的 β3 及GFP的表达 | 第48-50页 |
| 8. 转基因小鼠血小板与游离纤维蛋白原的结合 | 第50-51页 |
| 9. 转基因小鼠血小板在固相化纤维蛋白原上的伸展 | 第51-54页 |
| 讨论 | 第54-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64页 |
