| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 绪论 | 第13-20页 |
| 第一部分 Sema3E在胃癌中表达下调 | 第20-38页 |
| 1.1 材料与方法 | 第20-28页 |
| 1.1.1 仪器设备 | 第20页 |
| 1.1.2 试剂配方 | 第20-21页 |
| 1.1.3 组织来源 | 第21页 |
| 1.1.4 细胞株来源以及细胞培养 | 第21页 |
| 1.1.5 组织总RNA的抽提 | 第21-22页 |
| 1.1.6 细胞总RNA的抽提 | 第22-23页 |
| 1.1.7 半定量的RT‐PCR | 第23-24页 |
| 1.1.8 Real Time PCR | 第24-26页 |
| 1.1.9 免疫组织化学 | 第26-28页 |
| 1.1.10 统计分析 | 第28页 |
| 1.2 实验结果 | 第28-35页 |
| 1.2.1 SEMA3E mRNA在胃癌组织中表达情况 | 第28-29页 |
| 1.2.2 Sema3E蛋白在胃癌中的表达以及与胃癌分期的关系 | 第29-33页 |
| 1.2.3 SEMA3E mRNA在胃癌细胞株中表达水平 | 第33-34页 |
| 1.2.4 PLXND1在胃癌中的表达水平 | 第34-35页 |
| 1.3 讨论 | 第35-36页 |
| 1.4 小结 | 第36-38页 |
| 第二部分 组蛋白乙酰化/去乙酰化调控系统参与Sema3E的转录调控 | 第38-61页 |
| 2.1 材料与方法 | 第38-51页 |
| 2.1.1 仪器设备 | 第38-39页 |
| 2.1.2 试剂配方 | 第39-40页 |
| 2.1.3 组织来源 | 第40页 |
| 2.1.4 细胞株来源以及细胞培养 | 第40页 |
| 2.1.5 DAC、TSA、MGCD0103、MC1568和C646药物配制 | 第40-41页 |
| 2.1.6 组织总RNA的抽提 | 第41-42页 |
| 2.1.7 细胞总RNA的抽提 | 第42页 |
| 2.1.8 Real Time PCR | 第42-44页 |
| 2.1.9 真核表达载体构建 | 第44-46页 |
| 2.1.10 基因转染（质粒转染） | 第46-47页 |
| 2.1.11 蛋白免疫印迹（Western blot） | 第47-48页 |
| 2.1.12 荧光素酶报告试验 | 第48-51页 |
| 2.1.13 统计分析 | 第51页 |
| 2.2 实验结果 | 第51-59页 |
| 2.2.1 组蛋白去乙酰化酶HDAC参与SEMA3E的转录调控 | 第51-53页 |
| 2.2.2 I类HDAC参与SEMA3E的转录调控 | 第53-55页 |
| 2.2.3 组蛋白乙酰化酶p300参与SEMA3E的转录调控 | 第55-59页 |
| 2.3 讨论 | 第59-60页 |
| 2.4 小结 | 第60-61页 |
| 第三部分 Sema3E抑制胃癌细胞的体外增殖 | 第61-86页 |
| 3.1 材料与方法 | 第61-72页 |
| 3.1.1 仪器设备 | 第61页 |
| 3.1.2 试剂配方 | 第61-62页 |
| 3.1.3 细胞株以及细胞培养 | 第62-63页 |
| 3.1.4 SEMA3E真核表达构建 | 第63-65页 |
| 3.1.5 p61‐SEMA3E真核表达构建 | 第65-66页 |
| 3.1.6 载体转染 | 第66-67页 |
| 3.1.7 蛋白免疫印迹（Western blot） | 第67-68页 |
| 3.1.8 细胞活性检测 | 第68-69页 |
| 3.1.9 平板克隆形成 | 第69页 |
| 3.1.10 细胞周期分析 | 第69-70页 |
| 3.1.11 细胞凋亡分析 | 第70-71页 |
| 3.1.12 裸鼠皮下成瘤实验 | 第71页 |
| 3.1.13 半定量的RT‐PCR | 第71-72页 |
| 3.1.14 统计分析 | 第72页 |
| 3.2 实验结果 | 第72-85页 |
| 3.2.1 体外过表达Sema3E抑制胃癌细胞生长 | 第72-74页 |
| 3.2.2 体外过表达Sema3E导致胃癌细胞G0/G1期细胞周期阻滞并促进胃癌细胞凋亡 | 第74-78页 |
| 3.2.3 Sema3E可以抑制体外细胞株MGC‐803在裸鼠体内移植瘤的形成 | 第78-79页 |
| 3.2.4 Sema3E可能通过AKT、ERK、P21、Cyclin D1、Bax等下游信号分子实现抑制胃癌细胞生长和转移的功能 | 第79-82页 |
| 3.2.5 Sema3E抑制胃癌细胞的作用是通过全长的形式 | 第82-84页 |
| 3.2.6 干扰Sema3E表达促进胃癌细胞株的生长 | 第84-85页 |
| 3.3 讨论 | 第85页 |
| 3.4 小结 | 第85-86页 |
| 第四部分 Sema3E抑制胃癌细胞的体外迁移和侵袭 | 第86-98页 |
| 4.1 材料和方法 | 第86-92页 |
| 4.1.1 仪器设备 | 第86页 |
| 4.1.2 试剂配方 | 第86-87页 |
| 4.1.3 细胞株以及细胞培养 | 第87-88页 |
| 4.1.4 载体转染 | 第88页 |
| 4.1.5 重组基底膜侵袭实验 | 第88-89页 |
| 4.1.6 细胞迁移能力测定实验 | 第89页 |
| 4.1.7 划痕愈合实验 | 第89-90页 |
| 4.1.8 免疫荧光 | 第90-91页 |
| 4.1.9 蛋白免疫印迹 | 第91-92页 |
| 4.1.10 统计分析 | 第92页 |
| 4.2 实验结果 | 第92-96页 |
| 4.2.1 体外过表达Sema3E抑制胃癌细胞体外迁移和侵袭 | 第92-93页 |
| 4.2.2 Sema3E通过上调E‐cadherin，抑制ERK和Akt磷酸化来抑制胃癌细胞的转移和侵袭 | 第93-96页 |
| 4.3 讨论 | 第96-97页 |
| 4.4 小结 | 第97-98页 |
| 全文总结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 学术论文和科研成果目录 | 第105页 |
