| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| 1 前言 | 第14-15页 |
| 2 脂肪概论 | 第15-17页 |
| 2.1 脂肪组织的组成 | 第15-16页 |
| 2.1.1 白色脂肪 | 第15-16页 |
| 2.1.2 棕色脂肪 | 第16页 |
| 2.2 脂肪组织起源 | 第16-17页 |
| 3 脂肪细胞分化 | 第17-19页 |
| 3.1 脂肪细胞体外分化研究模型 | 第17页 |
| 3.2 脂肪细胞分化过程 | 第17-19页 |
| 3.2.1 生长抑制阶段 | 第18页 |
| 3.2.2 克隆增殖阶段 | 第18页 |
| 3.2.3 终末分化 | 第18-19页 |
| 4 脂肪细胞分化调控 | 第19-22页 |
| 4.1 PPARG | 第19-20页 |
| 4.2 C/EBPs | 第20-21页 |
| 4.3 其它调节因子 | 第21-22页 |
| 4.4 脂肪分化调节信号通路 | 第22页 |
| 5 脂肪代谢调控 | 第22-24页 |
| 6 FAM3A基因研究概况 | 第24-26页 |
| 6.1 FAM3家族 | 第24-25页 |
| 6.2 FAM3A基因 | 第25-26页 |
| 6.2.1 FAM3A基因结构特征及分布 | 第25页 |
| 6.2.2 FAM3A生物学功能 | 第25-26页 |
| 7 研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-50页 |
| 1 材料 | 第27-33页 |
| 1.1 主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| 1.2 主要材料及试剂 | 第28-29页 |
| 1.3 常用试剂配制 | 第29-32页 |
| 1.3.1 大肠杆菌培养基配制 | 第29-30页 |
| 1.3.2 细胞培养试剂配制 | 第30-31页 |
| 1.3.3 Western Blot试剂配制 | 第31-32页 |
| 1.3.4 其它试剂配制 | 第32页 |
| 1.4 生物信息学分析网站及软件 | 第32-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-50页 |
| 2.1 转录因子超表达实验 | 第33-36页 |
| 2.1.1 C/EBPbeta载体构建及转染 | 第33页 |
| 2.1.2 细胞培养及转染 | 第33-34页 |
| 2.1.3 QPCR分析 | 第34-35页 |
| 2.1.4 Western Blot | 第35-36页 |
| 2.2 小鼠FAM3A基因5'上游调控区域生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 2.3 小鼠启动子片断扩增及载体构建 | 第37-40页 |
| 2.3.1 缺失片断扩增引物设计 | 第37页 |
| 2.3.2 梯度PCR | 第37-38页 |
| 2.3.3 常规PCR | 第38页 |
| 2.3.4 PCR产物检测及回收 | 第38-39页 |
| 2.3.5 回收纯化产物双酶切 | 第39页 |
| 2.3.6 连接反应 | 第39页 |
| 2.3.7 转化 | 第39-40页 |
| 2.3.8 阳性克隆检测 | 第40页 |
| 2.3.9 质粒提取 | 第40页 |
| 2.3.10 酶切鉴定 | 第40页 |
| 2.4 启动子在不同真核细胞中的活性分析 | 第40-41页 |
| 2.4.1 细胞培养及转染 | 第40-41页 |
| 2.4.2 双荧光素酶活性检测 | 第41页 |
| 2.4.3 启动子活性统计分析 | 第41页 |
| 2.5 转录因子与启动子共转染实验 | 第41-42页 |
| 2.6 转录因子与突变启动子共转染实验 | 第42-43页 |
| 2.6.1 转录因子结合位点定点突变载体构建 | 第42-43页 |
| 2.6.2 点突变启动子活性检测 | 第43页 |
| 2.7 EMSA | 第43-47页 |
| 2.8 小鼠FAM3A基因超表达实验 | 第47-49页 |
| 2.8.1 小鼠FAM3A-pcDNA3.1(+)超表达载体构建 | 第47-48页 |
| 2.8.2 小鼠FAM3A基因转染3T3L1细胞 | 第48页 |
| 2.8.3 3T3L1细胞分化 | 第48页 |
| 2.8.4 QPCR分析小鼠FAM3A基因对成脂分化相关基因表达的影响 | 第48页 |
| 2.8.5 油红O染色及吸光度值分析 | 第48-49页 |
| 2.8.6 细胞周期实验 | 第49页 |
| 2.9 数据分析 | 第49-50页 |
| 第三章 结果与分析 | 第50-63页 |
| 1 C/EBPbeta对小鼠FAM3A基因表达的影响分析 | 第50页 |
| 2 FAM3A基因启动子活性分析 | 第50-53页 |
| 2.1 小鼠FAM3A基因启动子生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 2.2 小鼠FAM3A基因启动子缺失载体构建 | 第51-52页 |
| 2.3 小鼠FAM3A基因启动子活性检测 | 第52-53页 |
| 3 C/EBPbeta与小鼠FAM3A基因启动子互作分析 | 第53-55页 |
| 3.1 转录因子与小鼠FAM3A基因启动子缺失共转染实验 | 第53-54页 |
| 3.2 小鼠FAM3A启动子C/EBPbeta结合位点突变验证分析 | 第54-55页 |
| 3.3 EMSA鉴定C/EBPbeta与小鼠FAM3A基因启动子结合 | 第55页 |
| 4 小鼠FAM3A基因对3T3L1细胞成脂分化调控研究 | 第55-62页 |
| 4.1 小鼠FAM3A基因在3T3L1细胞分化各时期表达谱 | 第57-59页 |
| 4.2 小鼠FAM3A基因抑制3T3L1细胞分化过程中甘油三脂积累 | 第59-60页 |
| 4.3 小鼠FAM3A基因影响3T3L1细胞分化过程中脂肪标志基因表达 | 第60-62页 |
| 5 小鼠FAM3A基因抑制3T3L1细胞周期 | 第62-63页 |
| 第四章 讨论 | 第63-69页 |
| 1 小鼠FAM3A基因启动子活性分析 | 第63-64页 |
| 2 C/EBPbeta与启动子互作研究讨论 | 第64-65页 |
| 3 FAM3A参与脂肪细胞分化过程讨论 | 第65-67页 |
| 4 小鼠FAM3A基因抑制3T3L1细胞周期讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 结论 | 第69-70页 |
| 1 主要研究成果 | 第69页 |
| 2 本研究不足之处及下一步计划 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
