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Col XV对脂肪细胞分化和脂代谢的影响及其机制研究

摘要第6-8页
Abstract第8-10页
文献综述第14-26页
    第一章 Collagen XV研究进展第14-23页
        1.1 Collagens家族结构和分类第14-18页
            1.1.1 纤维状胶原第16页
            1.1.2 网络形成的胶原第16-17页
            1.1.3 含间断三维螺旋的纤维相关胶原(FACITs)第17页
            1.1.4 含间断三维螺旋的膜相关胶原(MACITs)第17页
            1.1.5 锚定胶原纤维第17页
            1.1.6 片段形成胶原第17-18页
            1.1.7 多螺旋域胶原(MULTIPLEXIN)第18页
        1.2 Collagens在脂代谢中的作用第18-21页
            1.2.1 胶原对脂肪细胞分化的调控第18-19页
            1.2.2 胶原对脂肪合成和分解代谢的调节第19-20页
            1.2.3 胶原沉积对肥胖等代谢疾病的影响第20-21页
        1.3 Col XV的结构与功能第21-23页
            1.3.1 Col XV的结构、分布和表达模式第21-22页
            1.3.2 Col XV的生理功能第22-23页
    第二章 脂肪细胞分化研究进展第23-26页
        2.1 体内脂肪组织的发育第23页
        2.2 脂肪细胞的成脂分化第23-26页
            2.2.1 脂肪细胞分化的转录调节第24-25页
            2.2.2 ECM对脂肪细胞分化的影响第25-26页
试验研究第26-61页
    前言第26-27页
    第三章 Col XV促进脂肪细胞分化和抑制脂解第27-41页
        3.1 材料第27-28页
            3.1.1 细胞第27-28页
            3.1.2 主要试剂及设备仪器第28页
        3.2 方法第28-31页
            3.2.1 脂肪细胞复苏、培养及冻存第28页
            3.2.2 细胞诱导分化第28页
            3.2.3 油红O染色第28-29页
            3.2.4 Bodipy染色第29页
            3.2.5 质粒提取第29页
            3.2.6 质粒载体转染第29页
            3.2.7 细胞总RNA提取第29页
            3.2.8 反转录及实时荧光定量PCR第29-30页
            3.2.9 细胞总蛋白提取第30页
            3.2.10 Western bloting检测第30-31页
            3.2.11 数据统计及分析第31页
        3.3 结果与分析第31-38页
            3.3.1 Col XV在脂肪细胞和脂肪组织中的表达规律第31-32页
            3.3.2 Col XV促进脂肪细胞分化第32-35页
            3.3.3 Col XV对脂肪细胞代谢的影响第35-36页
            3.3.4 Col XV通过cAMP/PKA调节脂肪细胞分化和脂代谢第36-38页
        3.4 讨论第38-40页
        3.5 小结第40-41页
    第四章 Col XV通过CREB负转录调控脂肪细胞分化和脂代谢第41-52页
        4.1 材料第41页
            4.1.1 实验动物、菌株、质粒及细胞第41页
            4.1.2 主要试剂设备仪器第41页
        4.2 方法第41-45页
            4.2.1 试剂盒法提取DNA第41页
            4.2.2 PCR扩增第41-42页
            4.2.3 胶回收第42页
            4.2.4 双酶切产物的连接第42-43页
            4.2.5 质粒转化第43页
            4.2.6 荧光素酶报告质粒定点突变第43-44页
            4.2.7 细胞复苏、培养及冻存第44页
            4.2.8 质粒载体提取与转染第44-45页
            4.2.9 细胞总RNA提取第45页
            4.2.10 反转录及实时定量PCR第45页
            4.2.11 细胞总蛋白提取第45页
            4.2.12 Western bloting检测第45页
            4.2.13 Dual-Luciferase? 双萤光素酶报告分析第45页
            4.2.14 数据统计及分析第45页
        4.3 结果与分析第45-50页
            4.3.1 Col XV启动子上荧光素酶报告载体的构建第45-47页
            4.3.2 Col XV启动子上转录因子CREB的结合与鉴定第47-48页
            4.3.3 Col XV通过CREB负转录调控脂肪细胞分化和脂代谢第48-50页
        4.4 讨论第50-51页
        4.5 小结第51-52页
    第五章 Col XV通过DNA甲基化调节脂肪细胞分化和脂代谢第52-61页
        5.1 材料第53页
            5.1.1 实验动物、菌株、质粒及细胞第53页
            5.1.2 主要试剂和设备仪器第53页
        5.2 方法第53-55页
            5.2.1 试剂盒法提取小鼠基因组DNA第53页
            5.2.2 BSP方法检测基因的DNA甲基化水平第53-54页
            5.2.3 Real-time PCR第54页
            5.2.4 数据统计及分析第54-55页
        5.3 结果与分析第55-59页
            5.3.1 脂肪细胞分化中Col XV DNA甲基化水平变化第55-57页
            5.3.2 Col XV对DNA甲基化转移酶表达的影响第57页
            5.3.3 Col XV通过抑制DNA甲基化调节脂肪细胞分化和脂代谢第57-59页
        5.4 讨论第59-60页
        5.5 小结第60-61页
结论、创新点以及进一步研究内容第61-62页
    1 结论第61页
    2 创新点第61页
    3 进一步研究内容第61-62页
参考文献第62-69页
附录第69-74页
致谢第74-75页
作者简介第75页

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