摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
缩略词表 | 第11-13页 |
第一章 前言 | 第13-25页 |
1.1 干扰素研究进展 | 第13-15页 |
1.1.1 干扰素生物学活性 | 第13-14页 |
1.1.2 ChIFN-γ 的研究进展 | 第14-15页 |
1.2 植物表皮毛概述 | 第15-23页 |
1.2.1 烟草腺毛的发育 | 第16-17页 |
1.2.2 调控烟草腺毛发育的相关基因 | 第17-18页 |
1.2.3 拟南芥表皮毛的发育 | 第18-19页 |
1.2.4 调控拟南芥表皮毛发育的基因 | 第19-21页 |
1.2.5 ChIFN-γ 调控烟草抗虫机制 | 第21-23页 |
1.3 研究目的和意义 | 第23-25页 |
第二章 候选基因的克隆 | 第25-46页 |
2.1 材料 | 第25-30页 |
2.1.1 植物材料 | 第25页 |
2.1.2 菌种和载体 | 第25页 |
2.1.3 主要化学试剂 | 第25-26页 |
2.1.4 试剂盒、酶制剂以及主要分子实验试剂 | 第26页 |
2.1.5 引物 | 第26-27页 |
2.1.6 主要实验仪器 | 第27-28页 |
2.1.7 储液、缓冲液和培养基 | 第28-30页 |
2.2 实验方法 | 第30-38页 |
2.2.1 烟草叶片总RNA的提取 | 第30-31页 |
2.2.2 RT-PCR扩增目的片断 | 第31-32页 |
2.2.3 目的DNA片段的胶回收纯化 | 第32-33页 |
2.2.4 目的片段与T载体连接 | 第33-34页 |
2.2.5 感受态大肠杆菌(E.coli DH5α)的制备和重组质粒的转化 | 第34-35页 |
2.2.6 重组质粒菌落PCR | 第35-36页 |
2.2.7 质粒的提取 | 第36-37页 |
2.2.8 质粒PCR检测 | 第37页 |
2.2.9 序列分析 | 第37-38页 |
2.3 结果与分析 | 第38-46页 |
2.3.1 烟草叶片总RNA的提取 | 第38页 |
2.3.2 目的基因的RT-PCR扩增 | 第38-39页 |
2.3.3 质粒的重组与转化 | 第39-41页 |
2.3.4 序列分析 | 第41-42页 |
2.3.5 蛋白质结构域分析 | 第42-43页 |
2.3.6 聚类分析 | 第43-46页 |
第三章 植物过表达载体构建和遗传转化拟南芥 | 第46-72页 |
3.1 材料 | 第46-50页 |
3.1.1 菌种和植物材料 | 第46页 |
3.1.2 载体 | 第46页 |
3.1.3 主要化学试剂 | 第46-47页 |
3.1.4 试剂盒、酶制剂以及主要分子实验试剂 | 第47-48页 |
3.1.5 主要实验仪器 | 第48页 |
3.1.6 引物序列 | 第48页 |
3.1.7 储液、缓冲液和培养基 | 第48-50页 |
3.2 实验方法 | 第50-58页 |
3.2.1 目的DNA片段的酶切引物扩增 | 第50-51页 |
3.2.2 目的DNA片断的酶切及其产物回收 | 第51页 |
3.2.3 载体的连接和转化 | 第51-53页 |
3.2.4 农杆菌感受态的制备和转化 | 第53-54页 |
3.2.5 拟南芥的培养 | 第54-55页 |
3.2.6 蘸花法浸染拟南芥 | 第55-56页 |
3.2.7 拟南芥基因组的提取 | 第56-57页 |
3.2.8 抗性植株PCR检测 | 第57-58页 |
3.2.9 抗性植株的GUS组织化学染色 | 第58页 |
3.3 结果与分析 | 第58-68页 |
3.3.1 E.coli DH5α 菌落PCR与质粒PCR验证 | 第58-59页 |
3.3.2 农杆菌LBA 4404菌落PCR与质粒PCR验证 | 第59-60页 |
3.3.3 蘸花法浸染拟南芥 | 第60-61页 |
3.3.4 抗性植株的筛选和鉴定 | 第61-64页 |
3.3.5 转基因拟南芥表皮毛数量性状观察 | 第64-68页 |
3.4 讨论 | 第68-72页 |
第四章 总结与展望 | 第72-74页 |
4.1 总结 | 第72-73页 |
4.2 展望 | 第73-74页 |
参考文献 | 第74-83页 |
致谢 | 第83页 |
在读期间参与科研项目 | 第83页 |
在读期间发表文章 | 第83-84页 |
附录 | 第84-87页 |