| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-25页 |
| 1.1 镉的污染状况及毒性研究进展 | 第16-17页 |
| 1.1.1 镉的理化性质 | 第16页 |
| 1.1.2 镉的污染状况 | 第16-17页 |
| 1.1.3 镉的肾毒性研究进展 | 第17页 |
| 1.2 细胞凋亡 | 第17-19页 |
| 1.2.1 死亡受体通路 | 第18页 |
| 1.2.2 线粒体凋亡途径 | 第18页 |
| 1.2.3 内质网凋亡信号通路 | 第18-19页 |
| 1.3 细胞自噬 | 第19-22页 |
| 1.3.1 自噬检测的困扰 | 第19页 |
| 1.3.2 自噬的过程 | 第19-20页 |
| 1.3.3 细胞自噬活性的检测 | 第20-21页 |
| 1.3.4 自噬小体数量的检测 | 第21页 |
| 1.3.5 自噬流的检测 | 第21页 |
| 1.3.6 LC3转化率分析 | 第21-22页 |
| 1.4 钙信号 | 第22-23页 |
| 1.4.1 胞内钙分布状况 | 第22页 |
| 1.4.2 胞内钙稳态 | 第22页 |
| 1.4.3 钙信号与细胞凋亡 | 第22-23页 |
| 1.4.4 钙信号与细胞自噬 | 第23页 |
| 1.5 氧化应激 | 第23-24页 |
| 1.5.1 氧化应激与细胞凋亡 | 第23-24页 |
| 1.5.2 氧化应激与细胞自噬 | 第24页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-39页 |
| 2.1 实验动物 | 第25页 |
| 2.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.3 主要仪器： | 第26-27页 |
| 2.4 相关实验试剂的配置 | 第27-30页 |
| 2.4.1 磷酸盐平衡液（PBS）的配置 | 第27页 |
| 2.4.2 消毒液酸液（次强酸）的配置 | 第27页 |
| 2.4.3 血清的处理 | 第27-28页 |
| 2.4.4 醋酸镉毒液配制 | 第28页 |
| 2.4.5 含钙及无钙DMEM-F12原代细胞培养基的配制与除菌 | 第28页 |
| 2.4.6 配制 1.0 M NaOH和 1.0 M HCl溶液 | 第28页 |
| 2.4.7 配制 2-APB | 第28页 |
| 2.4.8 BAPTA-AM的配制 | 第28-29页 |
| 2.4.9 配制TG | 第29页 |
| 2.4.10 NAC的配制 | 第29页 |
| 2.4.11 鼠尾胶原的制备 | 第29页 |
| 2.4.12 Western Blot相关溶液的配置 | 第29-30页 |
| 2.5 试验方法 | 第30-39页 |
| 2.5.1 原代培养及传代培养SD大鼠肾小管上皮细胞 | 第30-32页 |
| 2.5.2 染毒处理 | 第32页 |
| 2.5.3 胞浆钙离子浓度[Ca2+]c的检测 | 第32-33页 |
| 2.5.4 线粒体钙离子浓度[Ca2+]mit的检测 | 第33页 |
| 2.5.5 内质网钙离子浓度[Ca2+]ER的检测 | 第33-34页 |
| 2.5.6 IP_3含量的检测 | 第34页 |
| 2.5.7 检测细胞凋亡率 | 第34-35页 |
| 2.5.8 蛋白质免疫印迹试验（Western Blot） | 第35-37页 |
| 2.5.9 免疫荧光法鉴定LC3与LAMP-1 及LC3与Rab7的共定位情况 | 第37-38页 |
| 2.5.10 CCK-8 法检测细胞活性 | 第38页 |
| 2.5.11 细胞内ROS的水平测定 | 第38页 |
| 2.5.12 细胞转染 | 第38页 |
| 2.5.13 统计学分析 | 第38-39页 |
| 3 结果及分析 | 第39-73页 |
| 3.1 镉诱导大鼠肾小管上皮细胞胞浆钙离子超载主要来自细胞内 | 第39-40页 |
| 3.2 镉处理对肾小管上皮细胞胞内钙重分布的影响 | 第40-42页 |
| 3.3 镉诱导的胞浆钙离子升高主要来源于内质网 | 第42-44页 |
| 3.4 镉暴露激活IP_3-IP_3R通路使内质网钙外流导致胞浆钙超载 | 第44-46页 |
| 3.5 三种钙信号转导抑制剂对镉所致胞浆钙浓度的调控作用 | 第46-48页 |
| 3.5.1 采用流式细胞仪检测钙信号转导剂对胞浆钙浓度的影响 | 第46-47页 |
| 3.5.2 三种钙离子调控剂对calpain-1 蛋白表达的调控 | 第47-48页 |
| 3.6 三种钙离子调控剂对镉诱导的细胞毒性的影响 | 第48-51页 |
| 3.6.1 2-APB对镉诱导的细胞毒性的影响 | 第48-49页 |
| 3.6.2 TG对镉诱导的细胞毒性的影响 | 第49-50页 |
| 3.6.3 BAPTA-AM对镉诱导的细胞毒性的影响 | 第50-51页 |
| 3.7 镉诱导的胞浆钙超载对细胞凋亡的影响 | 第51-57页 |
| 3.7.1 2-APB对镉诱导的细胞凋亡的影响 | 第51-53页 |
| 3.7.2 TG对镉诱导的细胞凋亡的影响 | 第53-55页 |
| 3.7.3 BAPTA-AM对镉诱导的细胞凋亡的影响 | 第55-57页 |
| 3.8 镉浓度与时间对自噬标志蛋白的影响 | 第57-61页 |
| 3.9 镉诱导的胞浆钙超载抑制自噬流 | 第61-64页 |
| 3.10 钙信号调控剂对镉所诱导肾小管上皮细胞自噬小体蓄积的影响 | 第64-65页 |
| 3.11 镉染毒及药物处理后对自噬小体与溶酶体融合的影响 | 第65-67页 |
| 3.12 镉染毒及药物处理后对LC3与Rab7共定位的影响 | 第67-68页 |
| 3.13 镉诱导的胞浆钙超载与氧化应激的关系 | 第68-69页 |
| 3.14 氧化应激参与镉诱导的肾小管上皮细胞自噬抑制 | 第69-70页 |
| 3.15 氧化应激参与镉诱导的肾小管上皮细胞自噬体与溶酶体的融合抑制 | 第70-73页 |
| 3.15.1 NAC可恢复自噬小体与溶酶体融合 | 第70-71页 |
| 3.15.2 NAC可恢复自噬小体与Rab7融合 | 第71-73页 |
| 4 讨论 | 第73-77页 |
| 4.1 胞浆钙超载的来源 | 第73-74页 |
| 4.2 胞浆钙超载与细胞凋亡 | 第74页 |
| 4.3 镉与自噬抑制 | 第74-75页 |
| 4.4 胞浆钙超载与细胞自噬 | 第75-76页 |
| 4.5 氧化应激与自噬抑制 | 第76-77页 |
| 5 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第88页 |
