| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表（按字母顺序排列） | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1 Ⅰ型干扰素研究进展 | 第13-20页 |
| 1.1 Ⅰ型干扰素的分子结构 | 第13-14页 |
| 1.2 Ⅰ型干扰素的分泌 | 第14页 |
| 1.3 Ⅰ型干扰素的受体和信号通路 | 第14-16页 |
| 1.3.1 Ⅰ型干扰素受体 | 第14-15页 |
| 1.3.2 Ⅰ型干扰素信号通路 | 第15-16页 |
| 1.4 Ⅰ型干扰素生物学活性 | 第16-20页 |
| 1.4.1 抗病毒作用 | 第16-18页 |
| 1.4.2 免疫调节功能 | 第18页 |
| 1.4.3 抑制细胞增殖与抗肿瘤活性 | 第18-19页 |
| 1.4.4 诱导细胞凋亡 | 第19页 |
| 1.4.5 Ⅰ型干扰素的应用 | 第19-20页 |
| 2 中国大鲵虹彩病毒研究进展 | 第20-24页 |
| 2.1 大鲵虹彩病毒的发现 | 第20页 |
| 2.2 大鲵虹彩病毒病的流行特征与临床症状 | 第20-21页 |
| 2.3 大鲵虹彩病毒理化特性与生物学特性 | 第21页 |
| 2.4 大鲵虹彩病毒检测方法 | 第21-23页 |
| 2.4.1 细胞培养技术 | 第21-22页 |
| 2.4.2 分子生物学检测 | 第22页 |
| 2.4.3 电镜观察 | 第22-23页 |
| 2.4.4 免疫学检测 | 第23页 |
| 2.5 大鲵虹彩病毒病的防控 | 第23-24页 |
| 3 两栖类动物抗病毒免疫的研究 | 第24-27页 |
| 3.1 两栖动物免疫系统 | 第24-25页 |
| 3.1.1 非特异性免疫系统 | 第24页 |
| 3.1.2 特异性免疫系统 | 第24-25页 |
| 3.2 非洲爪蟾对病毒的免疫应答 | 第25-26页 |
| 3.3 蝾螈对病毒的免疫应答 | 第26页 |
| 3.4 虹彩病毒的免疫逃逸策略 | 第26-27页 |
| 4 研究目的与意义 | 第27-28页 |
| 第二章 大鲵Ⅰ型干扰素基因的克隆与生物信息学分析 | 第28-44页 |
| 1 材料和方法 | 第28-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 1.1.1 实验动物和菌种 | 第28页 |
| 1.1.2 实验试剂和耗材 | 第28-29页 |
| 1.1.3 实验仪器和设备 | 第29-30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-37页 |
| 1.2.1 大鲵组织样品总RNA和总DNA的提取 | 第30-31页 |
| 1.2.1.1 大鲵肾脏组织总RNA的提取 | 第30页 |
| 1.2.1.2 大鲵肝脏组织总DNA的提取 | 第30-31页 |
| 1.2.2 5’-RACE和 3’-RACE末端c DNA合成 | 第31-32页 |
| 1.2.3 RACE法扩增大鲵TypeⅠIFN基因c DNA全长 | 第32-33页 |
| 1.2.4 染色体步移技术扩增大鲵TypeⅠIFN基因全长 | 第33-35页 |
| 1.2.5 生物信息学分析 | 第35-37页 |
| 2 实验结果 | 第37-42页 |
| 2.1 大鲵TypeⅠIFN (gs IFN) 的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第37-38页 |
| 2.2 gs IFN基因结构分析 | 第38-39页 |
| 2.3 gs IFN氨基酸多重序列比对分析 | 第39-40页 |
| 2.4 gs IFN氨基酸进化树分析 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 大鲵Ⅰ型干扰素的组织表达分布与诱导表达 | 第44-54页 |
| 1 材料和方法 | 第44-50页 |
| 1.1 实验材料 | 第44-46页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第44-45页 |
| 1.1.2 细胞和病毒 | 第45页 |
| 1.1.3 实验试剂和耗材 | 第45页 |
| 1.1.4 实验仪器和设备 | 第45-46页 |
| 1.2 实验方法 | 第46-50页 |
| 1.2.1 大鲵虹彩病毒GSIV的培养与滴度测定 | 第46页 |
| 1.2.2 各组织RNA的提取和c DNA合成 | 第46-47页 |
| 1.2.3 gs IFN荧光定量引物的设计和合成 | 第47-48页 |
| 1.2.4 荧光定量PCR检测gs IFN在各组织中的分布 | 第48-49页 |
| 1.2.5 大鲵外周血白细胞 (peribheral blood leucocytes, PBLs) 的分离 | 第49页 |
| 1.2.6 Poly I:C和大鲵虹彩病毒 (GSIV) 体外诱导PBLs中gs IFN的表达 | 第49-50页 |
| 1.2.7 数据分析 | 第50页 |
| 2 实验结果 | 第50-53页 |
| 2.1 gs IFN荧光定量引物筛选 | 第50页 |
| 2.2 荧光定量检测gs IFN在大鲵各组织表达分布 | 第50-51页 |
| 2.3 荧光定量检测poly I:C诱导大鲵PBLs中gs IFN表达 | 第51-52页 |
| 2.4 荧光定量检测GSIV诱导大鲵PBLs中gs IFN表达 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 大鲵Ⅰ型干扰素真核表达载体的构建及功能研究 | 第54-71页 |
| 1 材料与方法 | 第54-62页 |
| 1.1 材料 | 第54-56页 |
| 1.1.1 细胞和病毒 | 第54-55页 |
| 1.1.2 实验试剂和耗材 | 第55页 |
| 1.1.3 实验仪器和设备 | 第55-56页 |
| 1.2 实验方法 | 第56-62页 |
| 1.2.1 引物的设计和合成 | 第56-57页 |
| 1.2.2 真核表达质粒p EGFP-N1-IFN的构建 | 第57-59页 |
| 1.2.2.1 gs IFN ORF片段扩增 | 第57页 |
| 1.2.2.2 p MD19-T-IFN和真核表达质粒p EGFP-N1双酶切与链接 | 第57-58页 |
| 1.2.2.3 转染用真核表达质粒的制备 | 第58-59页 |
| 1.2.3 真核表达质粒p EGFP-N1-IFN转染GS-M细胞与细胞筛选 | 第59-60页 |
| 1.2.3.1 GS-M细胞转染 | 第59-60页 |
| 1.2.3.2 GS-M转染阳性克隆筛选 | 第60页 |
| 1.2.4 GS-M中过表达gs IFN后抗病毒功能研究 | 第60-61页 |
| 1.2.4.1 荧光定量检测GSIV感染过表达细胞后相关基因的表达 | 第60-61页 |
| 1.2.4.2 间接荧光免疫检测GSIV感染过表达细胞MCP蛋白的表达 | 第61页 |
| 1.2.5 数据分析 | 第61-62页 |
| 2 实验结果 | 第62-68页 |
| 2.1 p EGFP-N1-IFN表达质粒的构建 | 第62-64页 |
| 2.1.1 gs IFN基因ORF的扩增 | 第62页 |
| 2.1.2 阳性克隆的筛选与酶切鉴定 | 第62-63页 |
| 2.1.3 重组质粒p EGFP-N1-IFN转染GS-M细胞 | 第63-64页 |
| 2.2 过表达细胞感染GSIV后Mx基因的表达 | 第64页 |
| 2.3 gs IFN过表达细胞感染GSIV细胞形态观察 | 第64-65页 |
| 2.4 gs IFN抑制GSIV病毒在GS-M细胞中增殖 | 第65-68页 |
| 2.4.1 荧光定量检测病毒MCP和IE-ICP46基因表达 | 第65-66页 |
| 2.4.2 GSIV病毒滴度的测定 | 第66-67页 |
| 2.4.3 间接荧光免疫检测MCP蛋白的表达 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| 总结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
