| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 主要英文缩写词 | 第7-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 PM_(2.5) 简介 | 第12-14页 |
| 1.1.1 PM_(2.5) 的定义及其来源 | 第12页 |
| 1.1.2 PM_(2.5) 与人体健康效应 | 第12-13页 |
| 1.1.3 PM_(2.5) 环境质量相关标准研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 PM_(2.5) 的毒理学研究 | 第14-16页 |
| 1.2.1 PM_(2.5) 的毒性作用机制 | 第14页 |
| 1.2.2 PM_(2.5) 的毒性效应指标 | 第14-15页 |
| 1.2.3 PM_(2.5) 的心血管毒性效应机制 | 第15-16页 |
| 1.2.4 芳香烃受体及其在环境污染物对心血管毒性效应中的作用研究 | 第16页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9基因编辑系统及其应用 | 第16-19页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9系统的组成结构 | 第16-17页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9系统的作用机制 | 第17-18页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9系统在基因编辑优势 | 第18页 |
| 1.3.4 CRISPR/Cas9系统在基因敲除及毒理学研究中的应用 | 第18-19页 |
| 1.4 本课题的研究内容 | 第19-20页 |
| 1.4.1 PM_(2.5) 对人血管内皮细胞HUVEC的毒性及其机制研究 | 第19页 |
| 1.4.2 CRISPR-Cas9敲除人AhR基因的质粒构建 | 第19-20页 |
| 1.5 本课题研究技术路线 | 第20-22页 |
| 1.5.1 PM_(2.5) 对人血管内皮细胞HUVEC的毒性及其机制研究 | 第20页 |
| 1.5.2 CRISPR-Cas9敲除人AhR基因的质粒构建 | 第20-22页 |
| 第2章 PM_(2.5) 对人血管内皮细胞的毒性作用及自噬效应研究 | 第22-38页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.2.1 实验细胞株 | 第22页 |
| 2.2.2 主要实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.3.1 大气PM_(2.5) 采集 | 第24页 |
| 2.3.2 提取PM_(2.5) 颗粒 | 第24页 |
| 2.3.3 细胞培养 | 第24-25页 |
| 2.3.4 细胞染毒 | 第25页 |
| 2.3.5 细胞存活率检测 | 第25页 |
| 2.3.6 细胞凋亡检测 | 第25-26页 |
| 2.3.7 细胞染色体损伤检测 | 第26页 |
| 2.3.8 透射电镜观察PM_(2.5) 对HUVEC细胞超微结构的影响 | 第26页 |
| 2.3.9 Western Blot检测自噬相关蛋白表达 | 第26-28页 |
| 2.3.10 自噬效应研究 | 第28-29页 |
| 2.3.11 数据统计学方法 | 第29页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第29-35页 |
| 2.4.1 PM_(2.5) 对HUVEC细胞存活率的影响 | 第29-30页 |
| 2.4.2 PM_(2.5) 对HUVEC细胞凋亡的影响 | 第30-31页 |
| 2.4.3 PM_(2.5) 对HUVEC细胞染色体损伤的影响 | 第31页 |
| 2.4.4 PM_(2.5) 对HUVEC细胞超微结构的影响 | 第31-34页 |
| 2.4.5 Western Blot检测自噬相关蛋白表达 | 第34页 |
| 2.4.6 PM_(2.5) 对HUVEC细胞自噬效应研究 | 第34-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-36页 |
| 2.6 本章小结 | 第36-38页 |
| 第3章 PM_(2.5) 对人血管内皮细胞的基因表达谱分析 | 第38-56页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 实验细胞株 | 第38页 |
| 3.2.2 实验动物 | 第38页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.4 主要实验仪器 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-44页 |
| 3.3.1 数字基因表达谱检测 | 第39页 |
| 3.3.2 实时荧光定量PCR验证差异基因表达 | 第39-41页 |
| 3.3.3 Western Bolt验证差异基因的蛋白表达 | 第41-43页 |
| 3.3.4 ELISA检测小鼠血清中F3的表达情况 | 第43-44页 |
| 3.3.5 数据统计学方法 | 第44页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第44-53页 |
| 3.4.1 差异表达基因分析 | 第44-47页 |
| 3.4.2 Gene Ontology (GO)功能显著性分析 | 第47-48页 |
| 3.4.3 KEGG pathway显著性富集分析 | 第48-50页 |
| 3.4.4 实时荧光定量PCR检测基因差异表达 | 第50-51页 |
| 3.4.5 Western Blot检测差异基因蛋白水平表达 | 第51-53页 |
| 3.4.6 小鼠血清中F3的表达 | 第53页 |
| 3.5 讨论 | 第53-54页 |
| 3.6 本章小结 | 第54-56页 |
| 第4章 CRISPR-Cas9敲除人AhR基因的质粒构建 | 第56-64页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第56页 |
| 4.2.2 工具和内切酶 | 第56页 |
| 4.2.3 主要实验仪器 | 第56-57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-59页 |
| 4.3.1 gRNA序列的设计与合成 | 第57页 |
| 4.3.2 寡核苷酸退火连接 | 第57页 |
| 4.3.3 载体质粒lentiCRISPR-V2酶切及胶回收 | 第57-58页 |
| 4.3.4 载体与目的片段的连接反应 | 第58页 |
| 4.3.5 连接产物的转化 | 第58-59页 |
| 4.3.6 小提并鉴定连接产物 | 第59页 |
| 4.4 实验结果 | 第59-61页 |
| 4.4.1 慢病毒质粒lentiCRISPR-V2酶切结果 | 第59-60页 |
| 4.4.2 慢病毒质粒lentiCRISPR-V2胶回收结果 | 第60页 |
| 4.4.3 重组质粒测序鉴定结果 | 第60-61页 |
| 4.5 讨论 | 第61-63页 |
| 4.6 本章小结 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 攻读硕士期间所发表的学术论文 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
