摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
英文缩略表 | 第13-14页 |
第一章 引言 | 第14-23页 |
1.1 血吸虫病概述 | 第14页 |
1.2 血吸虫病实验诊断方法研究概况 | 第14-18页 |
1.2.1 检测虫卵方法 | 第14-15页 |
1.2.2 检测抗体方法 | 第15-17页 |
1.2.3 检测抗原方法 | 第17页 |
1.2.4 检测DNA方法 | 第17-18页 |
1.3 血吸虫病诊断用抗原研究概况 | 第18-22页 |
1.3.1 虫体抗原 | 第18-19页 |
1.3.2 组分抗原 | 第19-20页 |
1.3.3 重组抗原 | 第20-22页 |
1.3.4 其他抗原 | 第22页 |
1.4 目的和意义 | 第22-23页 |
第二章 日本血吸虫沉积虫卵提取方法和间接血凝试验 | 第23-33页 |
2.1 引言 | 第23页 |
2.2 实验材料 | 第23-25页 |
2.2.1 生物材料 | 第23-24页 |
2.2.2 仪器设备 | 第24页 |
2.2.3 酶和试剂 | 第24页 |
2.2.4 试剂配方 | 第24-25页 |
2.3 实验方法 | 第25-27页 |
2.3.1 兔人工感染血吸虫尾蚴 | 第25页 |
2.3.2 肝脏虫卵计数 | 第25页 |
2.3.3 两种提取虫卵方法比较 | 第25-26页 |
2.3.4 制备虫卵可溶性抗原 | 第26页 |
2.3.5 虫卵可溶性抗原包被浓度确定 | 第26页 |
2.3.6 检测SEA灵敏度 | 第26页 |
2.3.7 检测SEA敏感性和检出率 | 第26页 |
2.3.8 SAS软件统计分析 | 第26页 |
2.3.9 间接血凝诊断试剂建立 | 第26-27页 |
2.4 结果 | 第27-31页 |
2.4.1 不同参数下NaOH消蚀法提取虫卵效果 | 第27-28页 |
2.4.2 提取虫卵两种方法的比较 | 第28-29页 |
2.4.3 消蚀法提取虫卵制备SEA用于检测血吸虫病 | 第29-30页 |
2.4.4 虫卵抗原检测的敏感性以及检出率 | 第30页 |
2.4.5 基于SEA的间接血凝实验 | 第30-31页 |
2.4.6 IHA检测鼠和兔阴阳性血清结果 | 第31页 |
2.5 讨论 | 第31-33页 |
第三章 沉积虫卵主要抗原成分分析 | 第33-53页 |
3.1 引言 | 第33页 |
3.2 实验材料 | 第33-36页 |
3.2.1 生物材料 | 第33-34页 |
3.2.2 仪器设备 | 第34页 |
3.2.3 主要试剂 | 第34页 |
3.2.4 试剂配方 | 第34-36页 |
3.3 实验方法 | 第36-42页 |
3.3.1 技术路线 | 第36-37页 |
3.3.2 虫卵可溶性抗原提取 | 第37页 |
3.3.3 日本血吸虫阳性血清IgG纯化 | 第37-38页 |
3.3.4 免疫亲和层析柱的制备及SEA的亲和层析 | 第38-39页 |
3.3.5 SEA组分的SDS-PAGE银染 | 第39-40页 |
3.3.6 Dot-blot鉴定免疫亲和层析后的SEA组分 | 第40页 |
3.3.7 LC-MS鉴定SEA亲和层析组分中的蛋白 | 第40-41页 |
3.3.8 SEA亲和层析组分蛋白的生物信息学分析 | 第41页 |
3.3.9 SEA亲和层析组分中糖蛋白分析 | 第41-42页 |
3.4 结果 | 第42-51页 |
3.4.1 日本血吸虫阳性血清IgG纯化 | 第42页 |
3.4.2 SDS-PAGE银染鉴定SEA亲和层析组分 | 第42-43页 |
3.4.3 Dot-blot鉴定SEA亲和层析组分抗原性 | 第43-44页 |
3.4.4 LC-MS鉴定SEA亲和层析组分中蛋白 | 第44页 |
3.4.5 SEA亲和层析组分生物信息学分析 | 第44-47页 |
3.4.6 SEA亲和层析组分糖蛋白分析 | 第47-49页 |
3.4.7 SEA亲和层析组分N-端糖基化预测 | 第49-51页 |
3.5 讨论 | 第51-53页 |
第四章 日本血吸虫P40的克隆表达及其作为早期诊断抗原的研究 | 第53-71页 |
4.1 引言 | 第53页 |
4.2 实验材料 | 第53-55页 |
4.2.1 生物材料 | 第53页 |
4.2.2 仪器设备 | 第53-54页 |
4.2.3 酶和试剂 | 第54页 |
4.2.4 试剂配方 | 第54-55页 |
4.3 实验方法 | 第55-61页 |
4.3.1 SjP40基因克隆及其相关生物信息学分析 | 第55-58页 |
4.3.2 重组质粒pET-28a(+)-SjP40的构建与鉴定 | 第58-59页 |
4.3.3 rSjP40的表达与纯化 | 第59-60页 |
4.3.4 Western Blotting分析rSjP40免疫原性 | 第60页 |
4.3.5 rSjP40免疫应答分析 | 第60-61页 |
4.3.6 评估rSjP40作为诊断抗原的应用价值 | 第61页 |
4.4 实验结果 | 第61-69页 |
4.4.1 SjP40的克隆及生物信息学分析 | 第61-65页 |
4.4.2 重组表达质粒pET-28a(+)-SjP40鉴定 | 第65-66页 |
4.4.3 重组表达质粒pET-28a(+)-SjP40诱导表达 | 第66页 |
4.4.4 重组表达质粒pET-28a(+)-SjP40纯化 | 第66-67页 |
4.4.5 Western Blot检测rSjP40免疫原性 | 第67页 |
4.4.6 rSjP40诱导BALB/c鼠体内的特异性抗体检测 | 第67-68页 |
4.4.7 rSjP40作为诊断抗原的应用价值 | 第68-69页 |
4.5 讨论 | 第69-71页 |
第五章 全文结论 | 第71-72页 |
参考文献 | 第72-80页 |
致谢 | 第80-81页 |
作者简历 | 第81页 |