| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 多杀性巴氏杆菌的病原学 | 第14-15页 |
| 1.1.1 历史与分类 | 第14页 |
| 1.1.2 生长及生化特性 | 第14-15页 |
| 1.1.3 血清型 | 第15页 |
| 1.2 多杀性巴氏杆菌病的流行特点及危害 | 第15-16页 |
| 1.2.1 流行特点 | 第15页 |
| 1.2.2 危害 | 第15-16页 |
| 1.3 多杀性巴氏杆菌病的临床症状 | 第16-18页 |
| 1.3.1 出血性败血症（Haemorrhagic Septicaemia，HS） | 第16-17页 |
| 1.3.2 下呼吸道感染（肺炎、胸膜炎） | 第17页 |
| 1.3.3 禽霍乱（fowL choLera，FC） | 第17页 |
| 1.3.4 萎缩性鼻炎（Atrophic Rhinitis，AR） | 第17-18页 |
| 1.3.5 其他临床症状 | 第18页 |
| 1.4 多杀性巴氏杆菌致病机制 | 第18-19页 |
| 1.5 多杀性巴氏杆菌毒力因子的研究 | 第19-23页 |
| 1.5.1 荚膜（Capsule，CP） | 第19-20页 |
| 1.5.2 粘附素（Adhesins）和菌毛（Fimbriae） | 第20页 |
| 1.5.3 脂多糖（ Lipopolysaccharide， LPS） | 第20-21页 |
| 1.5.4 外膜蛋白（Outer Membrane Proteins， OMPs） | 第21-22页 |
| 1.5.5 巴氏杆菌毒素（PMT） | 第22-23页 |
| 1.6 多杀性巴氏杆菌病的诊断与防治 | 第23-25页 |
| 1.6.1 多杀性巴氏杆菌的诊断 | 第23页 |
| 1.6.2 多杀性巴氏杆菌疫苗的研究 | 第23-25页 |
| 1.7 多杀性巴氏杆菌基因敲除的研究 | 第25-26页 |
| 第2章 引言 | 第26-28页 |
| 2.1 研究的目的与意义 | 第26页 |
| 2.2 研究内容 | 第26-27页 |
| 2.2.1 多杀性巴氏杆菌pm0979基因的生物信息学及体内外表达差异分析 | 第26-27页 |
| 2.2.2 pm0979基因的原核表达及其蛋白的细胞定位分析 | 第27页 |
| 2.2.3 多杀性巴氏杆菌PM0979致病性研究 | 第27页 |
| 2.3 技术路线 | 第27-28页 |
| 第3章 多杀性巴氏杆菌Pm0979基因生物信息学及体内外表达差异分析 | 第28-40页 |
| 3.1 材料 | 第28-30页 |
| 3.1.1 生物信息学分析软件及工具 | 第28-29页 |
| 3.1.2 菌种 | 第29页 |
| 3.1.3 试验动物 | 第29页 |
| 3.1.4 试剂 | 第29页 |
| 3.1.5 主要试剂的配制 | 第29页 |
| 3.1.6 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 3.2 方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 引物设计与合成 | 第30页 |
| 3.2.2 DNA模板的提取 | 第30-31页 |
| 3.2.3 目的基因的PCR扩增 | 第31页 |
| 3.2.4 小鼠肺脏样品的采集 | 第31页 |
| 3.2.5 RNA的提取 | 第31-32页 |
| 3.2.6 cDNA的制备 | 第32-33页 |
| 3.2.7 目的基因体内外相对表达的检测 | 第33页 |
| 3.3 结果 | 第33-38页 |
| 3.3.1 脂蛋白预测结果 | 第33-34页 |
| 3.3.2 跨膜结构域的预测结果 | 第34-35页 |
| 3.3.3 信号肽分析结果 | 第35页 |
| 3.3.4 细胞定位预测结果 | 第35-36页 |
| 3.3.5 同源性分析结果 | 第36页 |
| 3.3.6 目的基因PCR扩增结果 | 第36-37页 |
| 3.3.7 Pm0979基因体内外表达结果 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第4章 pm0979基因的原核表达及其蛋白的细胞定位分析 | 第40-52页 |
| 4.1 材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 试验动物 | 第40页 |
| 4.1.2 质粒 | 第40页 |
| 4.1.3 主要试剂盒 | 第40页 |
| 4.1.4 酶及主要生物试剂 | 第40页 |
| 4.1.5 主要试剂配制 | 第40-41页 |
| 4.2 方法 | 第41-46页 |
| 4.2.1 引物设计与合成 | 第41页 |
| 4.2.2 模板DNA的提取 | 第41-42页 |
| 4.2.3 目的基因的扩增与纯化 | 第42页 |
| 4.2.4 重组载体的构建 | 第42-43页 |
| 4.2.5 rPm0979蛋白的诱导表达及纯化 | 第43-44页 |
| 4.2.6 可溶蛋白rPM0979的除盐 | 第44页 |
| 4.2.7 抗体水平检测 | 第44-45页 |
| 4.2.8 间接免疫荧光（IFA） | 第45页 |
| 4.2.9 抗体封闭试验 | 第45-46页 |
| 4.3 结果 | 第46-48页 |
| 4.3.1 可溶蛋白rPM0979的表达及纯化结果 | 第46-47页 |
| 4.3.2 rPM0979定位特征及对PmCQ2粘附的影响 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-52页 |
| 4.4.1 可溶蛋白的表达及纯化 | 第48-49页 |
| 4.4.2 rPM0979定位特征及对PmCQ2的粘附 | 第49-52页 |
| 第5章 多杀性巴氏杆菌PM0979致病性研究 | 第52-72页 |
| 5.1 材料 | 第52-53页 |
| 5.1.1 菌种 | 第52页 |
| 5.1.2 试验动物 | 第52页 |
| 5.1.3 试剂盒 | 第52页 |
| 5.1.4 试剂 | 第52-53页 |
| 5.2 方法 | 第53-59页 |
| 5.2.1 PM0979蛋白诱导巨噬细胞的炎性反应 | 第53页 |
| 5.2.2 引物的设计与合成 | 第53-54页 |
| 5.2.3 质粒PUC19oriKanR的构建 | 第54页 |
| 5.2.4 重组质粒PUC19oriKanR -△0979的构建 | 第54-56页 |
| 5.2.5 PmCQ2菌株感受态的制备 | 第56-57页 |
| 5.2.6 重组质粒PUC19oriKan~R-0979的电转化 | 第57页 |
| 5.2.7 突变株PmCQ2-△0979的筛选 | 第57页 |
| 5.2.8 突变株PmCQ2-△0979的鉴定 | 第57-58页 |
| 5.2.9 突变株PmCQ2-△0979的生物学试验 | 第58页 |
| 5.2.10 突变株PmCQ2-△0979的生物膜试验 | 第58-59页 |
| 5.2.11 突变株PmCQ2-△0979小鼠攻毒试验 | 第59页 |
| 5.2.12 突变株PmCQ2-△0979诱导巨噬细胞的炎性反应 | 第59页 |
| 5.3 结果 | 第59-67页 |
| 5.3.1 可溶蛋白rPM0979诱导巨噬细胞的炎性反应结果 | 第59-60页 |
| 5.3.2 Pm0979基因上下游同源臂的扩增结果 | 第60-61页 |
| 5.3.3 重组质粒的鉴定结果 | 第61页 |
| 5.3.4 突变株PmCQ2-△0979的鉴定结果 | 第61-63页 |
| 5.3.5 突变株PmCQ2-△0979遗传稳定性鉴定结果 | 第63-64页 |
| 5.3.6 突变株PmCQ2-△0979生化特性结果 | 第64页 |
| 5.3.7 突变株PmCQ2-△0979体外生长特性结果 | 第64-65页 |
| 5.3.8 突变株PmCQ2-△0979生物膜测定结果 | 第65-66页 |
| 5.3.9 突变株PmCQ2-△0979小鼠攻毒试验结果 | 第66页 |
| 5.3.10 突变株PmCQ2-△0979诱导巨噬细胞的炎性反应结果 | 第66-67页 |
| 5.4 讨论 | 第67-72页 |
| 第6章 结论 | 第72-74页 |
| 6.1 多杀性巴氏杆菌pm0979基因的生物信息学及体内外表达差异分析 | 第72页 |
| 6.2 Pm0979基因的原核表达及其蛋白的细胞定位分析 | 第72页 |
| 6.3 多杀性巴氏杆菌PM0979致病性研究 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
