| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第7-11页 |
| 1 绪论 | 第11-29页 |
| 1.1 引言 | 第11-12页 |
| 1.2 研究背景及进展 | 第12-25页 |
| 1.2.1 RNA干扰技术的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.2 RNA干扰技术用于害虫控制 | 第15-17页 |
| 1.2.3 F_0F_1-ATP合成酶 | 第17-18页 |
| 1.2.4 昆虫病原真菌工程菌的研究进展 | 第18-25页 |
| 1.3 研究目的和研究意义 | 第25-26页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第25页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第25-26页 |
| 1.4 研究内容和技术路线 | 第26-29页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第26页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第26-29页 |
| 2 东亚飞蝗Lm-ATP5A的基因功能研究 | 第29-59页 |
| 2.1 材料 | 第29-33页 |
| 2.1.1 供试菌株及昆虫 | 第29页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.1.3 主要试剂及溶液配制 | 第30-33页 |
| 2.2 方法 | 第33-44页 |
| 2.2.0 大肠杆菌化学感受态细胞的转化及转化子检测 | 第33页 |
| 2.2.1 大肠杆菌质粒的提取 | 第33页 |
| 2.2.2 RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.2.3 用于定量及半定量的cDNA序列的合成 | 第34页 |
| 2.2.4 蛋白提取 | 第34-35页 |
| 2.2.5 蛋白浓度的测定 | 第35页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE | 第35-36页 |
| 2.2.7 Western blot | 第36页 |
| 2.2.8 线粒体提取及ATP酶活性测定 | 第36-37页 |
| 2.2.9 ATP含量测定 | 第37页 |
| 2.2.10 东亚飞蝗Lm-ATP5A全长基因序列克隆及分析 | 第37-39页 |
| 2.2.11 东亚飞蝗Lm-ATP5A的组织表达谱分析 | 第39-40页 |
| 2.2.12 东亚飞蝗Lm-ATP5A RNAi | 第40-43页 |
| 2.2.13 血细胞计数及染色 | 第43-44页 |
| 2.2.14 统计分析 | 第44页 |
| 2.3 结果和分析 | 第44-56页 |
| 2.3.1 东亚飞蝗Lm-ATP5A的克隆和序列分析 | 第44-47页 |
| 2.3.2 蛋白分析 | 第47-48页 |
| 2.3.3 东亚飞蝗Lm-ATP5A不同组织表达量测定 | 第48-50页 |
| 2.3.4 注射dsATP5A降低靶标基因的表达 | 第50-53页 |
| 2.3.5 注射dsATP5A降低ATPase活性及ATP合成 | 第53-54页 |
| 2.3.6 Lm-ATP5A调节血淋巴中血细胞数量、血细胞中线粒体数量、形态及膜电势 | 第54-55页 |
| 2.3.7 Lm-ATP5A对东亚飞蝗的存活是必需的 | 第55-56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-59页 |
| 3 绿僵菌表达东亚飞蝗双链RNA提高真菌杀虫毒力 | 第59-81页 |
| 3.1 材料 | 第59-63页 |
| 3.1.1 供试菌株及载体 | 第59页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第59页 |
| 3.1.3 主要试剂、培养基及溶液配制 | 第59-63页 |
| 3.2 方法 | 第63-73页 |
| 3.2.1 农杆菌感受态细胞的制备及农杆菌的电转化 | 第63-64页 |
| 3.2.2 绿僵菌孢子的培养 | 第64页 |
| 3.2.3 农杆菌与绿僵菌的共培养 | 第64页 |
| 3.2.4 ATP5A-RNAi载体的构建 | 第64-68页 |
| 3.2.5 快速微量提取真菌基因组 | 第68页 |
| 3.2.6 ATP5A-RNAi转化子筛选和初步验证 | 第68-69页 |
| 3.2.7 高表达dsRNA转化子筛选 | 第69-70页 |
| 3.2.8 真菌基因组DNA的大量提取 | 第70-71页 |
| 3.2.9 Southern blot验证转化子 | 第71-73页 |
| 3.2.10 毒力测定 | 第73页 |
| 3.2.11 真菌侵染后Lm-ATP5A表达分析 | 第73页 |
| 3.2.12 绿僵菌侵染昆虫后血细胞中虫菌体含量测定 | 第73页 |
| 3.3 结果和分析 | 第73-79页 |
| 3.3.1 ATP5A-RNAi干扰载体构建 | 第73-74页 |
| 3.3.2 ATP5A-RNAi转基因菌株转化子的初筛 | 第74-75页 |
| 3.3.3 高表达转化子筛选与验证 | 第75-77页 |
| 3.3.4 ATPA-RNAi转化子毒力测试 | 第77页 |
| 3.3.5 真菌侵染后宿主靶基因表达量的测定 | 第77-78页 |
| 3.3.6 真菌在昆虫血细胞中的观察和生物量的测定 | 第78-79页 |
| 3.4 讨论 | 第79-81页 |
| 4 全文小结与后续工作建议 | 第81-83页 |
| 4.1 主要研究结果 | 第81-82页 |
| 4.1.1 东亚飞蝗Lm-ATP5A的基因功能研究 | 第81页 |
| 4.1.2 绿僵菌表达东亚飞蝗双链RNA提高真菌杀虫毒力 | 第81-82页 |
| 4.2 本论文创新点 | 第82页 |
| 4.3 后续工作建议 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-101页 |
| 附录 作者在攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第101页 |
