| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 细胞周期调节机制 | 第12-13页 |
| 1.2 细胞周期蛋白(Cyclin)概述 | 第13-15页 |
| 1.2.1 细胞周期蛋白的发现 | 第13页 |
| 1.2.2 细胞周期蛋白的结构和功能 | 第13-14页 |
| 1.2.3 细胞周期蛋白的分类 | 第14-15页 |
| 1.3 细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)概述 | 第15-16页 |
| 1.3.1 细胞周期蛋白依赖性激酶的发现 | 第15页 |
| 1.3.2 植物细胞周期蛋白依赖性激酶的分类 | 第15-16页 |
| 1.4 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKI)的研究 | 第16-17页 |
| 1.4.1 CKI在哺乳动物中的研究 | 第16-17页 |
| 1.4.2 CKI在植物中的研究 | 第17页 |
| 1.5 CDK8的研究 | 第17-20页 |
| 第二章 引言 | 第20-22页 |
| 2.1 研究背景及意义 | 第20页 |
| 2.2 本文研究的主要内容和技术路线 | 第20-22页 |
| 2.2.1 主要研究内容 | 第20-21页 |
| 2.2.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 第三章 烟草CDK激酶家族的鉴定及生物信息学分析 | 第22-36页 |
| 3.1 材料与方法 | 第22-23页 |
| 3.1.1 物种的基因组数据库 | 第22页 |
| 3.1.2 分析软件及网站 | 第22页 |
| 3.1.3 分析方法 | 第22-23页 |
| 3.2 结果与分析 | 第23-34页 |
| 3.2.1 烟草CDK基因家族的鉴定 | 第23-27页 |
| 3.2.2 烟草中不同CDK亚家族的同源比对分析 | 第27-34页 |
| 3.3 小结讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 烟草NtCDK8基因的克隆与分析 | 第36-56页 |
| 4.1 实验材料和试剂仪器 | 第36-39页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第36页 |
| 4.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第36-37页 |
| 4.1.4 主要试剂及缓冲液配方 | 第37-39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-46页 |
| 4.2.1 烟草NtCDK8基因的同源性比对检索及引物设计 | 第39页 |
| 4.2.2 植物材料的处理和RNA提取 | 第39-40页 |
| 4.2.3 逆转录合成cDNA第一链 | 第40页 |
| 4.2.4 目的基因NtCDK8的克隆 | 第40页 |
| 4.2.5 目的基因NtCDK8扩增产物的回收 | 第40-41页 |
| 4.2.6 阳性克隆菌液PCR检测及测序 | 第41-42页 |
| 4.2.7 目的基因NtCDK8的生物信息学分析 | 第42页 |
| 4.2.8 胁迫材料的处理 | 第42页 |
| 4.2.9 叶片不同部位的取材 | 第42页 |
| 4.2.10 荧光定量PCR检测 | 第42-43页 |
| 4.2.11 NtCDK8的亚细胞定位 | 第43-46页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第46-54页 |
| 4.3.1 烟草总RNA的质量检测 | 第46页 |
| 4.3.2 烟草NtCDK8基因的分子克隆 | 第46-47页 |
| 4.3.3 NtCDK8蛋白的理化性质分析 | 第47-48页 |
| 4.3.4 NtCDK8蛋白的二级结构预测 | 第48-49页 |
| 4.3.5 NtCDK8亚细胞定位及功能预测 | 第49-50页 |
| 4.3.6 烟草基因NtCDK8在逆境胁迫条件下表达模式分析 | 第50-52页 |
| 4.3.7 烟草基因NtCDK不同组织表达谱分析 | 第52-53页 |
| 4.3.8 NtCDK8的亚细胞定位观察 | 第53-54页 |
| 本章小结 | 第54-56页 |
| 第五章 NtCDK8超表达载体的构建及转基因植株功能验证 | 第56-70页 |
| 5.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第56页 |
| 5.1.2 载体及菌种 | 第56页 |
| 5.1.3 主要仪器设备及试剂 | 第56页 |
| 5.1.4 主要培养基配方 | 第56-57页 |
| 5.2 实验方法与步骤 | 第57-62页 |
| 5.2.1 引物设计与载体构建 | 第57-59页 |
| 5.2.2 正向插入阳性重组子筛选 | 第59页 |
| 5.2.3 农杆菌化学感受态的制备 | 第59页 |
| 5.2.4 重组表达载体转化农杆菌LBA4404 | 第59页 |
| 5.2.5 农杆菌阳性转化子的筛选 | 第59页 |
| 5.2.6 目的基因遗传转化体系构建 | 第59-60页 |
| 5.2.7 阳性转化植株的筛选 | 第60-61页 |
| 5.2.8 NtCDK8超表达植株表达谱 | 第61页 |
| 5.2.9 NtCDK8超表达植株的蛋白水平鉴定 | 第61页 |
| 5.2.10 超表达植株的表型观察 | 第61页 |
| 5.2.11 超表达NtCDK8植株接种PstDC3000分析 | 第61-62页 |
| 5.3 结果与分析 | 第62-68页 |
| 5.3.1 烟草NtCDK8基因超表达载体构建 | 第62页 |
| 5.3.2 NtCDK8超表达株系获取 | 第62-64页 |
| 5.3.3 NtCDK8超表达植株的表达谱分析 | 第64页 |
| 5.3.4 NtCDK8超表达植株的蛋白水平验证 | 第64-65页 |
| 5.3.5 NtCDK8超表达植株的抗病检测 | 第65-67页 |
| 5.3.6 NtCDK8超表达植株的表型观察 | 第67-68页 |
| 本章小结 | 第68-70页 |
| 第六章 结论与展望 | 第70-72页 |
| 6.1 主要结论 | 第70-71页 |
| 6.2 后续研究工作 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 硕士期间发表的文章及参研课题情况 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
