摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
常用中英文缩写词 | 第10-11页 |
文献综述 | 第11-23页 |
1 MHC研究概况 | 第11-16页 |
1.1 MHC分子的起源 | 第11-12页 |
1.2 B-F/B-L分子结构 | 第12-15页 |
1.2.1 B-F分子的结构 | 第12-13页 |
1.2.2 B-L分子的结构 | 第13-14页 |
1.2.3 MHC分子和抗原肽的作用特性 | 第14-15页 |
1.3 MHC分子的分布 | 第15-16页 |
1.3.1 MHC Ⅰ类分子的分布 | 第15页 |
1.3.2 MHC Ⅱ类分子的分布 | 第15-16页 |
2 MHC Ⅱ分子的生物学功能 | 第16-20页 |
2.1 MHC Ⅱ类分子的主要功能 | 第16-17页 |
2.2 Ii链的生物学功能 | 第17-20页 |
2.2.1 Ii链对MHC Ⅱ分子呈递抗原过程中的协助作用 | 第17-19页 |
2.2.2 Ii链促进B细胞的分化、成熟 | 第19页 |
2.2.3 Ii链与MHC Ⅱ分子相互作用的研究现状 | 第19-20页 |
3 ITC在蛋白相互作用中的应用 | 第20-23页 |
3.1 ITC技术的发展 | 第20页 |
3.2 ITC技术的原理 | 第20-21页 |
3.3 ITC技术的应用 | 第21-23页 |
引言 | 第23-24页 |
1 材料与方法 | 第24-40页 |
1.1 实验材料 | 第24-29页 |
1.1.1 质粒和菌株 | 第24页 |
1.1.2 蛋白 | 第24页 |
1.1.3 酶类及相关试剂 | 第24页 |
1.1.4 主要试剂配制 | 第24-28页 |
1.1.4.1 培养细菌所用溶液 | 第24-25页 |
1.1.4.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
1.1.4.3 制备感受态细胞试剂 | 第25页 |
1.1.4.4 SDS-PAGE电泳所用试剂 | 第25-27页 |
1.1.4.5 Weston-Bloting实验相关试剂 | 第27页 |
1.1.4.6 融合蛋白提取与纯化所需溶液 | 第27页 |
1.1.4.7 Folin-酚法测蛋白浓度所需试剂 | 第27-28页 |
1.1.5 主要仪器 | 第28-29页 |
1.2 鸡B-LB基因的原核表达 | 第29-37页 |
1.2.1 鸡B-LB基因片段的克隆 | 第29-31页 |
1.2.2 鸡B-LB26209、218、223 基因重组质粒的构建 | 第31-35页 |
1.2.2.1 pET-28a质粒载体的抽提 | 第31-32页 |
1.2.2.2 鸡B-LB26209、218、223 基因重组片段的双酶切 | 第32页 |
1.2.2.3 双酶切产物的回收与纯化 | 第32页 |
1.2.2.4 鸡B-LB26209、218、223 基因重组片段分别与载体pET-28a的连接 | 第32-33页 |
1.2.2.5 大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞的制备 | 第33页 |
1.2.2.6 重组质粒pET-28a-B-LB26209、pET-28a-B-LB26218、pET-28a-B-LB26223 的转化 | 第33-34页 |
1.2.2.7 阳性菌的筛选与鉴定 | 第34页 |
1.2.2.8 重组质粒的抽提 | 第34页 |
1.2.2.9 重组质粒的双酶切鉴定 | 第34-35页 |
1.2.3 重组载体的原核表达 | 第35页 |
1.2.4 含有His标签的融合蛋白的提取与纯化 | 第35-37页 |
1.2.4.1 含有His标签的融合蛋白表达条件优化 | 第35-36页 |
1.2.4.2 含有His标签的融合蛋白表达形式的鉴定 | 第36-37页 |
1.2.4.3 融合蛋白His/B-LB26209、218、223 的大量提取与纯化 | 第37页 |
1.3 免疫印迹鉴定纯化蛋白(Western Bloting) | 第37-38页 |
1.4 ITC等温滴定测定鸡B-L与li蛋白相互作用(Isothermal Titration Calorimetry) | 第38-40页 |
2 结果与分析 | 第40-52页 |
2.1 鸡B-LB基因的分析、克隆及重组表达质粒的构建与鉴定 | 第40-43页 |
2.1.1 鸡B-LB基因的分析、克隆及原核重组表达质粒的鉴定 | 第40-41页 |
2.1.2 鸡B-LB重组质粒测序鉴定 | 第41-43页 |
2.2 重组质粒的表达与鉴定 | 第43页 |
2.3 含有His标签的融合蛋白提取与纯化鉴定 | 第43-48页 |
2.3.1 含有His标签的融合蛋白表达条件的优化 | 第43-45页 |
2.3.2 含有His标签融合蛋白表达形式的鉴定 | 第45-47页 |
2.3.3 融合蛋白纯化效果鉴定 | 第47-48页 |
2.3.4 BSA标准曲线及蛋白浓度测定 | 第48页 |
2.4 重组质粒原核表达分子的免疫学特征 | 第48-49页 |
2.5 ITC测定鸡B-L与Ii分子之间的相互作用 | 第49-52页 |
3 讨论 | 第52-54页 |
3.1 等温滴定量热(Isothermal Titration Calorimetry)的选择与应用 | 第52页 |
3.2 复性后的B-LB具有天然蛋白分子的结构 | 第52-53页 |
3.3 ITC实验优化与样品处理 | 第53-54页 |
结论 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-63页 |
致谢 | 第63-64页 |
作者简介 | 第64页 |