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鸡B-L与Ii基因表达产物的结合特性的研究

摘要第3-4页
Abstract第4-5页
常用中英文缩写词第10-11页
文献综述第11-23页
    1 MHC研究概况第11-16页
        1.1 MHC分子的起源第11-12页
        1.2 B-F/B-L分子结构第12-15页
            1.2.1 B-F分子的结构第12-13页
            1.2.2 B-L分子的结构第13-14页
            1.2.3 MHC分子和抗原肽的作用特性第14-15页
        1.3 MHC分子的分布第15-16页
            1.3.1 MHC Ⅰ类分子的分布第15页
            1.3.2 MHC Ⅱ类分子的分布第15-16页
    2 MHC Ⅱ分子的生物学功能第16-20页
        2.1 MHC Ⅱ类分子的主要功能第16-17页
        2.2 Ii链的生物学功能第17-20页
            2.2.1 Ii链对MHC Ⅱ分子呈递抗原过程中的协助作用第17-19页
            2.2.2 Ii链促进B细胞的分化、成熟第19页
            2.2.3 Ii链与MHC Ⅱ分子相互作用的研究现状第19-20页
    3 ITC在蛋白相互作用中的应用第20-23页
        3.1 ITC技术的发展第20页
        3.2 ITC技术的原理第20-21页
        3.3 ITC技术的应用第21-23页
引言第23-24页
1 材料与方法第24-40页
    1.1 实验材料第24-29页
        1.1.1 质粒和菌株第24页
        1.1.2 蛋白第24页
        1.1.3 酶类及相关试剂第24页
        1.1.4 主要试剂配制第24-28页
            1.1.4.1 培养细菌所用溶液第24-25页
            1.1.4.2 琼脂糖凝胶电泳第25页
            1.1.4.3 制备感受态细胞试剂第25页
            1.1.4.4 SDS-PAGE电泳所用试剂第25-27页
            1.1.4.5 Weston-Bloting实验相关试剂第27页
            1.1.4.6 融合蛋白提取与纯化所需溶液第27页
            1.1.4.7 Folin-酚法测蛋白浓度所需试剂第27-28页
        1.1.5 主要仪器第28-29页
    1.2 鸡B-LB基因的原核表达第29-37页
        1.2.1 鸡B-LB基因片段的克隆第29-31页
        1.2.2 鸡B-LB26209、218、223 基因重组质粒的构建第31-35页
            1.2.2.1 pET-28a质粒载体的抽提第31-32页
            1.2.2.2 鸡B-LB26209、218、223 基因重组片段的双酶切第32页
            1.2.2.3 双酶切产物的回收与纯化第32页
            1.2.2.4 鸡B-LB26209、218、223 基因重组片段分别与载体pET-28a的连接第32-33页
            1.2.2.5 大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞的制备第33页
            1.2.2.6 重组质粒pET-28a-B-LB26209、pET-28a-B-LB26218、pET-28a-B-LB26223 的转化第33-34页
            1.2.2.7 阳性菌的筛选与鉴定第34页
            1.2.2.8 重组质粒的抽提第34页
            1.2.2.9 重组质粒的双酶切鉴定第34-35页
        1.2.3 重组载体的原核表达第35页
        1.2.4 含有His标签的融合蛋白的提取与纯化第35-37页
            1.2.4.1 含有His标签的融合蛋白表达条件优化第35-36页
            1.2.4.2 含有His标签的融合蛋白表达形式的鉴定第36-37页
            1.2.4.3 融合蛋白His/B-LB26209、218、223 的大量提取与纯化第37页
    1.3 免疫印迹鉴定纯化蛋白(Western Bloting)第37-38页
    1.4 ITC等温滴定测定鸡B-L与li蛋白相互作用(Isothermal Titration Calorimetry)第38-40页
2 结果与分析第40-52页
    2.1 鸡B-LB基因的分析、克隆及重组表达质粒的构建与鉴定第40-43页
        2.1.1 鸡B-LB基因的分析、克隆及原核重组表达质粒的鉴定第40-41页
        2.1.2 鸡B-LB重组质粒测序鉴定第41-43页
    2.2 重组质粒的表达与鉴定第43页
    2.3 含有His标签的融合蛋白提取与纯化鉴定第43-48页
        2.3.1 含有His标签的融合蛋白表达条件的优化第43-45页
        2.3.2 含有His标签融合蛋白表达形式的鉴定第45-47页
        2.3.3 融合蛋白纯化效果鉴定第47-48页
        2.3.4 BSA标准曲线及蛋白浓度测定第48页
    2.4 重组质粒原核表达分子的免疫学特征第48-49页
    2.5 ITC测定鸡B-L与Ii分子之间的相互作用第49-52页
3 讨论第52-54页
    3.1 等温滴定量热(Isothermal Titration Calorimetry)的选择与应用第52页
    3.2 复性后的B-LB具有天然蛋白分子的结构第52-53页
    3.3 ITC实验优化与样品处理第53-54页
结论第54-55页
参考文献第55-63页
致谢第63-64页
作者简介第64页

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