| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第11-16页 |
| 1.1 Rab蛋白家族介绍 | 第11-12页 |
| 1.1.1 Rab循环 | 第11页 |
| 1.1.2 Rab蛋白的膜靶标 | 第11-12页 |
| 1.1.3 Rab7简介 | 第12页 |
| 1.2 Toll样受体家族介绍 | 第12-15页 |
| 1.2.1 TLRs简介 | 第12-13页 |
| 1.2.2 TLR9与配体 | 第13页 |
| 1.2.3 TLR9活化后的信号转导 | 第13-14页 |
| 1.2.4 TLR9与疾病 | 第14-15页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第15-16页 |
| 2 Rab7对巨噬细胞中TLR9活化后产生的Ⅰ型IFN的调控及机制研究 | 第16-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 细胞株及主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第16-17页 |
| 2.1.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶与浓缩胶的配制 | 第17页 |
| 2.1.5 荧光定量引物序列 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 RAW264.7细胞的培养 | 第18-19页 |
| 2.2.2 siRNA转染RAW264.7 | 第19页 |
| 2.2.3 质粒转染及稳定表达细胞系的筛选 | 第19页 |
| 2.2.4 细胞总RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.2.5 cDNA的制备 | 第20页 |
| 2.2.6 Real time PCR检测 | 第20-21页 |
| 2.2.7 细胞蛋白提取及BCA法蛋白含量的测定 | 第21-22页 |
| 2.2.8 SDS-PAGE电泳 | 第22页 |
| 2.2.9 Western Blot检测 | 第22页 |
| 2.2.10 ELISA试剂盒检测 | 第22-24页 |
| 3 结果分析 | 第24-40页 |
| 3.1 siRNA干扰后Rab7 mRNA的表达 | 第24页 |
| 3.2 Rab7对TLR9 mRNA和蛋白表达水平的影响 | 第24-27页 |
| 3.2.1 Rab7基因沉默后对TLR9 mRNA和蛋白表达水平的影响 | 第24-25页 |
| 3.2.2 Rab7过表达和突变后对TLR9 mRNA和蛋白表达水平的影响 | 第25-27页 |
| 3.2.3 小结 | 第27页 |
| 3.3 Rab7对TLR9活化后产生的Ⅰ型IFN和其它下游信号因子mRNA表达水平的影响 | 第27-33页 |
| 3.3.1 Rab7基因沉默后对TLR9活化后产生的Ⅰ型IFN和其它下游信号因子mRNA表达水平的影响 | 第27-31页 |
| 3.3.1.1 Rab7基因沉默后对CpG刺激的TNF-α、IL-1β、IL-10 mRNA表达的影响 | 第27-29页 |
| 3.3.1.2 Rab7基因沉默后对CpG刺激的IFN-α、IFN-β mRNA表达的影响 | 第29-30页 |
| 3.3.1.3 Rab7基因沉默后对CpG刺激的IP-10 mRNA表达的影响 | 第30页 |
| 3.3.1.4 Rab7基因沉默后对CpG刺激的iNOS mRNA表达的影响 | 第30-31页 |
| 3.3.2 Rab7过表达和突变后对TLR9活化后产生的Ⅰ型IFN和其它下游信号因子mRNA表达水平的影响 | 第31-33页 |
| 3.3.2.1 Rab7过表达和突变后对TNF-α和IL-1β mRNA表达的影响 | 第31-32页 |
| 3.3.2.2 Rab7过表达和突变后对IFN-α和IFN-β mRNA表达的影响 | 第32-33页 |
| 3.3.3 小结 | 第33页 |
| 3.4 Rab7对TLR9下游MAPK信号通路的影响 | 第33-38页 |
| 3.4.1 Rab7基因沉默后对TLR9下游MAPK信号通路的影响 | 第33-35页 |
| 3.4.2 Rab7基因过表达和突变后对TLR9下游MAPK信号通路的影响 | 第35-38页 |
| 3.4.3 小结 | 第38页 |
| 3.5 ERK、JNK、p38、NF-κB抑制剂预处理后,Rab7过表达及突变后细胞培养上清中IFN-β和IL-10分泌的变化 | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 6 展望 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 作者简介 | 第48页 |
