| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| 1.1 毛囊的组成及周期 | 第9页 |
| 1.2 FGF5基因的功能及研究 | 第9-10页 |
| 1.3 基因编辑技术的发展 | 第10-13页 |
| 1.3.1 锌指酶技术 | 第10-11页 |
| 1.3.2 TALEN技术 | 第11页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9技术 | 第11-13页 |
| 1.4 基因编辑技术的应用 | 第13-14页 |
| 1.4.1 CRIPSR/cas9基因编辑技术的应用 | 第13-14页 |
| 1.5 本研究的目的意义及内容 | 第14-15页 |
| 2 CRISPR/Cas9编辑绒山羊FGF5基因真核表达载体的构建及活性检测 | 第15-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 实验设备及耗材 | 第15页 |
| 2.1.2 实验试剂及配制 | 第15-16页 |
| 2.1.3 载体及菌种 | 第16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-26页 |
| 2.2.1 CRISPR/gRNA载体构建 | 第16-18页 |
| 2.2.2 SSA活性检测Cas/gRNA质粒活性 | 第18-23页 |
| 2.2.3 T7核酸内切酶Ⅰ法检测Cas/gRNA质粒活性 | 第23-26页 |
| 2.3 实验结果 | 第26-29页 |
| 2.3.1 Cas/gRNA载体构建 | 第26-27页 |
| 2.3.2 SSA活性检测Cas/gRNA质粒活性 | 第27-29页 |
| 2.3.3 T7核酸内切酶Ⅰ法检测Cas/gRNA质粒活性 | 第29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-32页 |
| 3 CRISPR/Cas9技术编辑绒山羊FGF5基因细胞株的建立 | 第32-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验设备 | 第32页 |
| 3.1.2 实验试剂及及耗材 | 第32页 |
| 3.1.3 实验主要试剂的配制 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 3.2.1 质粒准备 | 第33页 |
| 3.2.2 绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞的复苏 | 第33-34页 |
| 3.2.3 绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞的传代 | 第34页 |
| 3.2.4 绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞的冻存 | 第34页 |
| 3.2.5 细胞转染 | 第34-35页 |
| 3.2.6 单细胞的培养与鉴定 | 第35页 |
| 3.2.7 细胞基因组DNA提取及测序鉴定 | 第35-37页 |
| 3.3 实验结果 | 第37-40页 |
| 3.3.1 细胞转染 | 第37-38页 |
| 3.3.2 单细胞的筛选及扩大培养 | 第38页 |
| 3.3.3 转基因细胞株的鉴定 | 第38-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-42页 |
| 4 全文结论 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录 | 第49-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
