| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 概述 | 第7-8页 |
| 1.1.1 乳酸菌及其工业应用 | 第7页 |
| 1.1.2 乳酸菌面临的环境胁迫 | 第7-8页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第8-13页 |
| 1.2.1 乳酸菌的酸胁迫响应机制 | 第8-10页 |
| 1.2.2 乳酸菌酸胁迫抗性的提升策略 | 第10-12页 |
| 1.2.3 利用精氨酸代谢提高酸胁迫抗性 | 第12-13页 |
| 1.3 本论文的主要研究内容 | 第13-15页 |
| 1.3.1 立题依据和研究意义 | 第13页 |
| 1.3.2 本论文主要研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| 2.1 材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 仪器 | 第15-16页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.4 培养基及培养条件 | 第16页 |
| 2.2 过量表达ArgG和ArgH蛋白提高L. lactis胁迫抗性 | 第16-18页 |
| 2.2.1 质粒和乳酸菌基因组的提取 | 第16页 |
| 2.2.2 乳酸菌感受态的制备及电转化 | 第16页 |
| 2.2.3 重组质粒的构建及转化 | 第16-17页 |
| 2.2.4 乳酸菌菌落PCR | 第17页 |
| 2.2.5 重组菌株的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第17页 |
| 2.2.6 ASS和ASL活性分析 | 第17页 |
| 2.2.7 重组菌株在多种胁迫条件下生长性能的分析 | 第17页 |
| 2.2.8 重组菌株在环境胁迫条件下存活能力分析 | 第17-18页 |
| 2.2.9 重组菌株在胁迫条件下发酵性能的分析 | 第18页 |
| 2.3 重组菌株酸胁迫生理响应机制 | 第18-20页 |
| 2.3.1 胁迫条件 | 第18页 |
| 2.3.2 胞内H~+-ATPase活性的检测 | 第18页 |
| 2.3.3 胞内pH (pHi)的测定 | 第18页 |
| 2.3.4 胞内氨基酸浓度的确定 | 第18页 |
| 2.3.5 荧光定量PCR | 第18-20页 |
| 2.3.6 糖酵解途径关键酶活的测定 | 第20页 |
| 2.3.7 胞内ATP、NH_4~+的检测 | 第20页 |
| 2.3.8 蛋白浓度的测定 | 第20页 |
| 2.4 L. lactis NZ9000中argR基因的敲除 | 第20-22页 |
| 2.4.1 质粒pNZ5319的改造 | 第20页 |
| 2.4.2 敲除质粒pNZ5319/argR的构建 | 第20-21页 |
| 2.4.3 L.lactis NZ9000中argR基因的敲除 | 第21页 |
| 2.4.4 敲除菌株在多种胁迫条件下生长性能的分析 | 第21页 |
| 2.4.5 敲除菌株在环境胁迫条件下存活能力分析 | 第21-22页 |
| 2.4.6 敲除菌株定量PCR | 第22页 |
| 2.5 敲除菌株中回补表达argR基因对其胁迫抗性的影响 | 第22-23页 |
| 2.5.1 argR基因在L. lactis NZ9000ΔargR中的表达 | 第22页 |
| 2.5.2 敲除菌株中回补表达argR基因对其胁迫抗性的影响 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-35页 |
| 3.1 过量表达ArgG和ArgH蛋白提高L. lactis胁迫抗性 | 第23-26页 |
| 3.1.1 重组菌的构建和诱导表达 | 第23-24页 |
| 3.1.2 表达ArgG和ArgH蛋白对L. lactis环境胁迫抗性的影响 | 第24-25页 |
| 3.1.3 胁迫条件下菌株的发酵性能分析 | 第25-26页 |
| 3.2 重组菌株酸胁迫生理响应机制 | 第26-31页 |
| 3.2.1 ArgG和ArgH蛋白对胞内ATP和NH4+的影响 | 第26-27页 |
| 3.2.2 ArgG和ArgH蛋白对胞内pH和H~+-ATPase的影响 | 第27-28页 |
| 3.2.3 ArgG和ArgH蛋白对糖酵解途径的影响 | 第28-29页 |
| 3.2.4 ArgG和ArgH蛋白对氨基酸代谢的影响 | 第29-31页 |
| 3.3 L. lactis NZ9000中argR基因的敲除对胁迫抗性的影响 | 第31-33页 |
| 3.3.1 L.lactis NZ9000中argR基因的敲除 | 第31-32页 |
| 3.3.2 敲除菌株在多种胁迫条件下生长性能的分析 | 第32页 |
| 3.3.3 敲除菌株在酸胁迫条件下存活能力分析 | 第32-33页 |
| 3.3.4 argR基因的敲除对基因转录情况的影响 | 第33页 |
| 3.4 敲除菌株中回补表达argR基因对其胁迫抗性的影响 | 第33-35页 |
| 3.4.1 敲除菌株中回补表达argR基因对其胁迫抗性的影响 | 第33-34页 |
| 3.4.2 敲除菌株中回补表达argR基因对其酸胁迫存活能力的影响 | 第34-35页 |
| 主要结论与展望 | 第35-37页 |
| 主要结论 | 第35-36页 |
| 展望 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第42页 |
