| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-17页 |
| 第一章 γ-PGA产生菌及其产物合成与特性(综述) | 第17-42页 |
| 引言 | 第17页 |
| 1. γ-PGA的生物合成基础 | 第17-20页 |
| ·合成γ-PGA的菌株 | 第17-19页 |
| ·γ-PGA的生物合成途径 | 第19页 |
| ·合成γ-PGA的有关基因 | 第19-20页 |
| ·cap基因 | 第19页 |
| ·pgs基因 | 第19-20页 |
| 2. γ-PGA的生产 | 第20-30页 |
| ·γ-PGA的微生物发酵生产 | 第20-26页 |
| ·培养基组分的影响 | 第21-24页 |
| ·搅拌及通气量的影响 | 第24-25页 |
| ·γ-PGA生物合成路径的改进 | 第25-26页 |
| ·代谢工程微生物的γ-PGA生产 | 第26-28页 |
| ·γ-PGA的固态基质发酵 | 第28-29页 |
| ·γ-PGA发酵的动力学建模 | 第29页 |
| ·γ-PGA的回收和纯化 | 第29-30页 |
| ·液态基质发酵的产物回收 | 第29-30页 |
| ·固态基质发酵的γ-PGA_回收 | 第30页 |
| 3 γ-PGA的性质 | 第30-33页 |
| ·γ-PGA流变学研究 | 第31页 |
| ·γ-PGA的分子量 | 第31-33页 |
| ·碱环境中的水解 | 第32页 |
| ·超声波降解 | 第32页 |
| ·加热过程中的自发水解 | 第32-33页 |
| ·微生物降解和酶的生物降解 | 第33页 |
| 4 γ-PGA的应用 | 第33-40页 |
| ·药物领域的应用 | 第33-35页 |
| ·药物载体 | 第33-34页 |
| ·生物黏合剂 | 第34-35页 |
| ·组织工程 | 第35页 |
| ·化妆品领域的应用 | 第35-36页 |
| ·在食品工业领域的应用 | 第36页 |
| ·废水回收中的应用 | 第36-37页 |
| ·重金属离子的吸收 | 第36-37页 |
| ·生物絮凝剂 | 第37页 |
| ·农业上的应用 | 第37页 |
| ·其它潜在的应用 | 第37-40页 |
| ·低温保护剂 | 第37-38页 |
| ·生物可降解的塑料制品 | 第38页 |
| ·对比剂 | 第38页 |
| ·疫苗佐剂 | 第38-39页 |
| ·基因传递载体 | 第39页 |
| ·固定作用 | 第39-40页 |
| ·微囊载体 | 第40页 |
| 5 本课题的研究目的与意义 | 第40-42页 |
| 第二章 三株产聚谷氨酸菌CC、DL和TW的鉴定 | 第42-64页 |
| 前言 | 第42-43页 |
| 1 材料 | 第43-44页 |
| ·菌种 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43-44页 |
| ·仪器 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-48页 |
| ·形态学方法鉴定聚谷氨酸产生菌CC、DL、TW | 第44-46页 |
| ·菌种保藏 | 第44-45页 |
| ·菌落形态观察 | 第45页 |
| ·菌体染色 | 第45页 |
| ·透射电镜观察 | 第45-46页 |
| ·扫描电镜观察 | 第46页 |
| ·分子生物学方法鉴定聚谷氨酸产生菌CC、DL、TW | 第46-48页 |
| ·基因组提取及电泳检测 | 第46页 |
| ·16S rRNA的扩增和序列分析 | 第46页 |
| ·RiboPrinter系统全自动基因指纹鉴定 | 第46-47页 |
| ·质粒提取和序列分析 | 第47页 |
| ·产γ-PGA相关基因的鉴定与序列分析 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-60页 |
| ·形态学鉴定结果 | 第48-56页 |
| ·菌落形态 | 第48-49页 |
| ·菌体显微观察 | 第49-52页 |
| ·菌体透射电镜观察 | 第52-53页 |
| ·菌体扫描电镜观察 | 第53-56页 |
| ·分子水平的分类鉴定结果 | 第56-60页 |
| ·16S rDNA序列的测定及系统发育树构建 | 第56-57页 |
| ·核糖体分型鉴定结果 | 第57-58页 |
| ·质粒提取与序列分析 | 第58-59页 |
| ·capBCAE基因序列测定与比对 | 第59页 |
| ·ywtD基因序列测定与比对 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-64页 |
| 第三章 三株产聚谷氨酸菌的产物性质研究 | 第64-86页 |
| 前言 | 第64-65页 |
| 1 材料 | 第65-66页 |
| ·菌种 | 第65页 |
| ·培养基 | 第65-66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| ·仪器 | 第66页 |
| 2 方法 | 第66-69页 |
| ·菌种活化 | 第66-67页 |
| ·菌种保藏 | 第67页 |
| ·发酵产物结构分析 | 第67页 |
| ·γ-PGA的分离纯化 | 第67页 |
| ·核磁共振分析 | 第67页 |
| ·红外色谱分析 | 第67页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的发酵参数测定 | 第67页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的生长曲线测定 | 第67页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的发酵pH曲线测定 | 第67页 |
| ·γ-PGA产量测定 | 第67-68页 |
| ·γ-PGA分子量测定 | 第68页 |
| ·三株γ-PGA产生菌的γ-PGA分子量测定(琼脂糖凝胶电泳法) | 第68页 |
| ·三株γ-PGA产生菌的γ-PGA分子量测定(乌氏粘度计法) | 第68页 |
| ·γ-PGA比旋光度测定 | 第68页 |
| ·γ-PGA絮凝活性测定 | 第68-69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-84页 |
| ·发酵产物结构分析 | 第69-73页 |
| ·核磁共振分析 | 第69-71页 |
| ·红外色谱分析 | 第71-73页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的发酵参数测定 | 第73-75页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的生长曲线测定结果 | 第73-74页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的发酵pH曲线测定结果 | 第74-75页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的γ-PGA产量测定结果 | 第75页 |
| ·γ-PGA分子量测定 | 第75-78页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的γ-PGA分子量测定(琼脂糖凝胶电泳法) | 第75-76页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的γ-PGA分子量测定(乌氏粘度计法) | 第76-77页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌γ-PGA分子量变化 | 第77-78页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的γ-PGA比旋光度测定 | 第78-79页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的γ-PGA絮凝性能研究 | 第79-84页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的γ-PGA在水溶液中的絮凝性能 | 第79-80页 |
| ·三株产聚谷氨酸菌的γ-PGA在NaCl溶液中的絮凝性能 | 第80-81页 |
| ·γ-PGA分子量对絮凝活性的影响 | 第81-82页 |
| ·发酵菌株对絮凝活性的影响 | 第82-83页 |
| ·NaCl溶液对絮凝活性的影响 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-86页 |
| 第四章 Plackett-Burman设计与最陡爬坡实验优化枯草芽孢杆菌DL产γ-聚谷氨酸发酵培养基 | 第86-94页 |
| 前言 | 第86页 |
| 1 材料 | 第86-88页 |
| ·菌种 | 第86页 |
| ·培养基 | 第86-87页 |
| ·试剂 | 第87-88页 |
| ·仪器 | 第88页 |
| 2 方法 | 第88-90页 |
| ·培养方法 | 第88页 |
| ·菌种保藏 | 第88页 |
| ·菌种活化 | 第88页 |
| ·种子培养 | 第88页 |
| ·发酵培养 | 第88页 |
| ·γ-PGA产量测定 | 第88-89页 |
| ·优化方法 | 第89-90页 |
| ·Plackett-Burman试验设计 | 第89页 |
| ·最陡爬坡试验设计 | 第89-90页 |
| 3 结果与分析 | 第90-92页 |
| ·Plackett-Burman试验确定关键影响因素 | 第90-91页 |
| ·最陡爬坡实验 | 第91-92页 |
| 4 结论 | 第92-94页 |
| 第五章 枯草芽孢杆菌DL产γ-聚谷氨酸固态培养发酵优化 | 第94-103页 |
| 前言 | 第94页 |
| 1 材料 | 第94-96页 |
| ·菌种 | 第94页 |
| ·培养基 | 第94-95页 |
| ·试剂 | 第95页 |
| ·仪器 | 第95-96页 |
| 2 方法 | 第96-97页 |
| ·γ-PGA的固体发酵(黄豆培养法) | 第96页 |
| ·γ-PGA的固体发酵(豆粕粉培养法) | 第96页 |
| ·γ-PGA的分离回收 | 第96页 |
| ·γ-PGA产率测定 | 第96-97页 |
| 3 结果与分析 | 第97-100页 |
| ·黄豆培养法 | 第97-98页 |
| ·豆粕粉培养法 | 第98-100页 |
| ·谷氨酸钠添加量对γ-PGA的产率影响 | 第98-99页 |
| ·麦芽糖添加量对γ-PGA产率的影响 | 第99-100页 |
| 4 讨论 | 第100-103页 |
| 第六章 枯草芽孢杆菌TW的基因改造初探 | 第103-115页 |
| 前言 | 第103页 |
| 1 材料 | 第103-105页 |
| ·菌株与质粒 | 第103-104页 |
| ·菌株 | 第103-104页 |
| ·质粒 | 第104页 |
| ·培养基 | 第104页 |
| ·酶及试剂盒 | 第104页 |
| ·仪器 | 第104-105页 |
| 2 实验方法 | 第105-110页 |
| ·TW菌株的活化 | 第105页 |
| ·菌株TW基因组DNA的提取 | 第105页 |
| ·筛选基因kan的确定 | 第105页 |
| ·构建pUC19-kan重组质粒 | 第105-106页 |
| ·构建pUC19-kan-ywtD-R重组质粒 | 第106-108页 |
| ·构建pUC19-kan-ywtD-R-L重组质粒 | 第108-109页 |
| ·CaCl_2法转化枯草芽孢杆菌TW | 第109页 |
| ·电击转化枯草芽孢杆菌TW | 第109-110页 |
| 3 结果与分析 | 第110-113页 |
| ·菌株TW卡那霉素抗性检测 | 第110页 |
| ·卡那霉素抗性基因制备与连接 | 第110-111页 |
| ·ywtD基因同源右臂制备连接与鉴定 | 第111-112页 |
| ·ywtD基因同源左臂制备连接与鉴定 | 第112-113页 |
| 4 讨论 | 第113-115页 |
| 附录 | 第115-133页 |
| 参考文献 | 第133-147页 |
| 致谢 | 第147页 |
