| 中文摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 1 前言 | 第16-31页 |
| ·禽白血病简介 | 第16-19页 |
| ·ALV-J病毒的结构特征 | 第17-18页 |
| ·流行病学 | 第18-19页 |
| ·ALV-J的检测和诊断 | 第19-21页 |
| ·病毒的分离和鉴定 | 第19-20页 |
| ·血清学检测 | 第20页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR）技术 | 第20-21页 |
| ·致肿瘤机制 | 第21页 |
| ·ALV引起的免疫抑制 | 第21-22页 |
| ·ALV-J的防治 | 第22-23页 |
| ·疫苗研究 | 第23-29页 |
| ·细胞表位 | 第24-26页 |
| ·表位疫苗的研究进展 | 第26页 |
| ·脂肽疫苗 | 第26-27页 |
| ·复合多价表位肽疫苗 | 第27页 |
| ·表位DNA疫苗 | 第27页 |
| ·“prime-boost”免疫策略 | 第27-28页 |
| ·Cp G免疫佐剂的研究进展 | 第28-29页 |
| ·前景展望 | 第29页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第29-31页 |
| 2 材料和方法 | 第31-67页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·数据库、生物信息学软件 | 第31页 |
| ·病毒和细胞 | 第31页 |
| ·质粒载体和工程菌 | 第31页 |
| ·工具酶 | 第31页 |
| ·抗体及血清 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·主要耗材 | 第32页 |
| ·仪器与设备 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-67页 |
| ·主要试剂配制 | 第33-37页 |
| ·细胞培养试剂 | 第33页 |
| ·细菌培养试剂 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE和Wbstern blot试剂 | 第34-35页 |
| ·包涵体洗涤及纯化的主要溶液 | 第35-36页 |
| ·间接ELISA试剂 | 第36页 |
| ·组织细胞DNA与RNA提取及大量提取重组真核表达质粒的试剂 | 第36-37页 |
| ·ALV-J三个主要结构基因抗原表位集中区的预测筛选及嵌合基因的克隆 | 第37-45页 |
| ·ALV-J三个主要结构蛋白抗原表位的预测分析 | 第37页 |
| ·ALV-J代表毒株的同源性比对及抗原表位集中区的筛选 | 第37页 |
| ·嵌合多表位基因的构建 | 第37-38页 |
| ·扩增四段抗原表位集中区基因的引物 | 第38页 |
| ·Xl-X4基因片段的获取 | 第38-42页 |
| ·嵌合基因X克隆载体的构建 | 第42-45页 |
| ·嵌合多表位基因X的生物信息学分析 | 第45页 |
| ·ALV-J嵌合多表位基因X的原核表达研究 | 第45-54页 |
| ·嵌合多表位基因X原核表达载体的构建 | 第45-48页 |
| ·p ET-30a(+)-X的原核表达 | 第48-50页 |
| ·嵌合基因X最佳表达条件的确定 | 第50-51页 |
| ·重组包涵体蛋白的变性与复性 | 第51-52页 |
| ·检测重组蛋白抗体的间接ELISA方法的建立 | 第52-54页 |
| ·嵌合多表位基因DNA疫苗的制备 | 第54-58页 |
| ·嵌合基因X真核表达载体的构建 | 第54-56页 |
| ·嵌合多表位基因X真核表达的检测 | 第56-58页 |
| ·嵌合基因X相关疫苗的免疫研究 | 第58-67页 |
| ·实验动物 | 第58页 |
| ·免疫原 | 第58页 |
| ·疫苗的免疫研究 | 第58-63页 |
| ·疫苗的攻毒保护实验 | 第63-67页 |
| 3 结果 | 第67-85页 |
| ·ALV-J嵌合多表位基因X的设计及克隆载体的构建 | 第67-72页 |
| ·ALV-J三个主要结构蛋白抗原表位的预测结果 | 第67-68页 |
| ·抗原表位集中基因片段的确定及获得 | 第68-70页 |
| ·嵌合多表位基因X的构建 | 第70-71页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定 | 第71-72页 |
| ·嵌合多表位基因X的结构特征分析 | 第72页 |
| ·嵌合多表位基因X的原核表达研究 | 第72-78页 |
| ·重组表达载体p ET-30a(+)-X的鉴定 | 第72-73页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE及Western b1ots检测 | 第73-74页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第74-75页 |
| ·重组蛋白检测特异性抗体的间接ELISA方法的建立 | 第75-78页 |
| ·最佳抗原包被浓度和抗血清稀释度的确定 | 第75-76页 |
| ·酶标二抗最佳稀释倍数的确定 | 第76页 |
| ·间接ELISA方法阴阳性临界值的确定 | 第76-77页 |
| ·敏感性试验 | 第77页 |
| ·特异性试验 | 第77-78页 |
| ·嵌合多表位基因DNA疫苗的制备 | 第78-80页 |
| ·重组p VAX-X质粒的鉴定 | 第78-79页 |
| ·重组真核质粒的大量提取和纯化 | 第79-80页 |
| ·间接免疫荧光检测pVAX-X质粒的表达产物 | 第80页 |
| ·疫苗免疫效果评估 | 第80-85页 |
| ·各组免疫鸡的抗体水平 | 第80-81页 |
| ·各组免疫鸡的外周血CD4+、CD8+ T淋巴细胞比率 | 第81-82页 |
| ·间接免疫荧光实验检测抗血清与ALV-J的特异性结合 | 第82页 |
| ·特异性中和抗体水平 | 第82-83页 |
| ·ELISA法检测IFN-γ和IL-4 细胞因子 | 第83-84页 |
| ·病毒血症的检测结果 | 第84页 |
| ·泄殖腔棉拭子p27抗原的检测结果 | 第84页 |
| ·实验鸡病毒感染的检测结果 | 第84-85页 |
| 4 讨论 | 第85-91页 |
| ·设计和构建嵌合多表位基因 | 第85-86页 |
| ·原核表达嵌合多表位基因 | 第86-88页 |
| ·真核表达嵌合多表位基因 | 第88-89页 |
| ·嵌合多表位基因相关疫苗的免疫保护效果 | 第89-91页 |
| 5 结论 | 第91-92页 |
| 6 参考文献 | 第92-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第107页 |
