| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| ·毕赤酵母（Pichia pastoris）简介及应用 | 第11-15页 |
| ·毕赤酵母简介 | 第11页 |
| ·毕赤酵母表达系统的组成 | 第11-14页 |
| ·毕赤酵母表达系统的应用现状 | 第14-15页 |
| ·毕赤酵母鼠李糖代谢途径 | 第15-18页 |
| ·鼠李糖简介 | 第15页 |
| ·鼠李糖代谢途径简介 | 第15页 |
| ·鼠李糖代谢相关基因研究 | 第15-18页 |
| ·课题研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| ·课题研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 毕赤酵母鼠李糖代谢相关基因预测与验证 | 第20-35页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·试验材料与仪器 | 第20-21页 |
| ·实验菌株 | 第20页 |
| ·实验试剂及试剂盒 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·实验仪器 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·不同碳源条件下P. pastoris GS115的生长状况 | 第21-22页 |
| ·P. pastoris GS115鼠李糖代谢相关基因预测 | 第22页 |
| ·总RNA提取 | 第22-23页 |
| ·反转录合成c DNA | 第23页 |
| ·Real-time PCR | 第23页 |
| ·毕赤酵母同源重组载体构建 | 第23-26页 |
| ·连接产物的大肠杆菌转化 | 第26-27页 |
| ·LRA4破坏与回补 | 第27页 |
| ·阳性克隆质粒提取 | 第27-28页 |
| ·质粒线性化 | 第28页 |
| ·毕赤酵母转化 | 第28-29页 |
| ·LRA4鼠李糖代谢相关性验证 | 第29-30页 |
| ·实验结果 | 第30-33页 |
| ·P. pastoris GS115在YPD与YPR中的生长情况 | 第30页 |
| ·鼠李糖代谢相关基因 | 第30-31页 |
| ·预测基因转录水平 | 第31-32页 |
| ·LRA4的氨基酸序列比对 | 第32页 |
| ·LRA4鼠李糖代谢相关性验证 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33页 |
| ·本章小结 | 第33-35页 |
| 第三章 鼠李糖诱导型启动子P_（0075）和P_(0341)特性分析 | 第35-45页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·试验材料与仪器 | 第35-36页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第35页 |
| ·实验试剂 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35-36页 |
| ·实验仪器 | 第36页 |
| ·试验方法 | 第36-40页 |
| ·P0075和P0341表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·连接产物的大肠杆菌转化 | 第37页 |
| ·阳性克隆检测 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆质粒提取 | 第38页 |
| ·质粒线性化 | 第38页 |
| ·毕赤酵母转化 | 第38页 |
| ·不同碳源对目的基因表达量的影响 | 第38页 |
| ·不同浓度的鼠李糖对目的基因表达量的影响 | 第38-39页 |
| ·重组菌株的活化与诱导表达 | 第39页 |
| ·β?半乳糖苷酶的测定 | 第39页 |
| ·SDS?聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS?PAGE） | 第39-40页 |
| ·荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-43页 |
| ·不同碳源、不同浓度鼠李糖对启动子控制基因表达的影响 | 第40-42页 |
| ·不同启动子对lac B基因表达的影响 | 第42页 |
| ·不同启动子对gfp基因表达的影响 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 P_（0075）最小功能区域确定 | 第45-59页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·试验材料与仪器 | 第45-46页 |
| ·实验菌株或质粒 | 第45页 |
| ·实验试剂 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·实验仪器 | 第46页 |
| ·试验方法 | 第46-51页 |
| ·P0075截短DNA片段的获取 | 第46-48页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第48页 |
| ·回收产物与载体连接 | 第48-49页 |
| ·连接产物的大肠杆菌转化 | 第49页 |
| ·阳性克隆检测 | 第49-50页 |
| ·阳性克隆质粒提取 | 第50页 |
| ·质粒线性化 | 第50页 |
| ·毕赤酵母转化 | 第50页 |
| ·毕赤酵母转化子的初步筛选 | 第50-51页 |
| ·β?半乳糖苷酶以o NPG为底物的活性测定 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-57页 |
| ·连接产物转到大肠杆菌中转化子验证 | 第51页 |
| ·质粒线性化结果 | 第51-52页 |
| ·转化子蓝白班筛选 | 第52-53页 |
| ·对阳性转化子进行小筛 | 第53-57页 |
| ·讨论 | 第57页 |
| ·本章小结 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-69页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
