| 中文摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-32页 |
| ·植酸及其危害 | 第20-21页 |
| ·植酸及其测定方法 | 第20-21页 |
| ·植酸的拮抗作用 | 第21页 |
| ·植酸酶 | 第21-23页 |
| ·植酸酶的来源 | 第22页 |
| ·植酸酶的分类 | 第22-23页 |
| ·中性植酸酶 | 第23-26页 |
| ·中性植酸酶的来源 | 第23页 |
| ·中性植酸酶的性质 | 第23-24页 |
| ·中性植酸酶的结构及催化机理 | 第24页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第24-25页 |
| ·中性植酸酶的应用 | 第25-26页 |
| ·植酸酶的基因工程 | 第26-29页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第26-27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第27页 |
| ·巨大芽孢杆菌表达系统 | 第27-28页 |
| ·微生物表达植酸酶基因 | 第28页 |
| ·植酸酶基因在植物中的表达 | 第28-29页 |
| ·桑树转基因研究 | 第29-32页 |
| 第二章 引言 | 第32-38页 |
| ·研究背景 | 第32-33页 |
| ·磷的重要性及植酸的危害 | 第32页 |
| ·中性植酸酶的优越性 | 第32-33页 |
| ·研究目的及意义 | 第33-34页 |
| ·BPP类植酸酶广泛应用于生产 | 第33页 |
| ·桑叶及家蚕与植酸的关联性 | 第33页 |
| ·中性植酸酶基因转化桑树的意义 | 第33-34页 |
| ·主要研究内容要点 | 第34-35页 |
| ·桑叶中植酸含量的测定 | 第34页 |
| ·土壤中芽孢杆菌的筛选及鉴定 | 第34页 |
| ·中性植酸酶phyC基因的克隆 | 第34页 |
| ·中性植酸酶phyC基因的原核表达和酵母表达 | 第34-35页 |
| ·桑树外植体的组织培养及卡那霉素抗性筛选 | 第35页 |
| ·桑树基因转化的初步研究 | 第35页 |
| ·技术路线 | 第35-38页 |
| 第三章 桑叶中植酸含量的测定研究 | 第38-50页 |
| ·材料和药品 | 第38-39页 |
| ·植物材料 | 第38页 |
| ·材料的处理 | 第38页 |
| ·试剂和药品 | 第38页 |
| ·主要溶液 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·植酸标准曲线的制作 | 第39页 |
| ·样品中植酸的提取 | 第39页 |
| ·样品中植酸含量的测定 | 第39-40页 |
| ·样品中植酸提取条件的优化 | 第40页 |
| ·响应曲面法的试验设计 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-47页 |
| ·供试品种桑叶的含水量分析 | 第41页 |
| ·植酸检测标准工作曲线建立 | 第41页 |
| ·单因素试验 | 第41-43页 |
| ·桑叶植酸提取条件的优化 | 第43-46页 |
| ·供试桑品种桑叶及5龄幼虫蚕粪中的植酸含量 | 第46-47页 |
| ·小结与讨论 | 第47-50页 |
| 第四章 土壤中枯草芽孢杆菌的分离筛选及鉴定 | 第50-62页 |
| ·材料和药品 | 第50-52页 |
| ·菌株和质粒 | 第50页 |
| ·试剂和药品 | 第50页 |
| ·主要培养基 | 第50-51页 |
| ·所使用的溶液 | 第51-52页 |
| ·实验仪器与设备 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-56页 |
| ·土壤样品的采集 | 第52页 |
| ·菌株的分离纯化 | 第52-53页 |
| ·菌株的生理生化鉴定 | 第53页 |
| ·菌株的16S rDNA序列分析 | 第53-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-61页 |
| ·菌落的形态 | 第57页 |
| ·菌株的部分特征 | 第57页 |
| ·菌株的schaeffer-fulton染色 | 第57-58页 |
| ·菌株的16S rDNA序列分析 | 第58-61页 |
| ·小结与讨论 | 第61-62页 |
| 第五章 中性植酸酶phyC基因的克隆及生物信息学分析 | 第62-78页 |
| ·材料和药品 | 第62-63页 |
| ·菌株和质粒 | 第62页 |
| ·试剂和药品 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-64页 |
| ·引物设计 | 第63页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第63-64页 |
| ·目的片段的回收、连接、转化 | 第64页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第64页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第64页 |
| ·植酸酶phyC序列的生物信息学分析 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-76页 |
| ·中性植酸酶phyC的扩增 | 第64-65页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第65页 |
| ·克隆片段的DNA序列测定 | 第65-66页 |
| ·芽孢杆菌WYCQ02植酸酶phyC的序列比较分析 | 第66-73页 |
| ·芽孢杆菌WYCQ02植酸酶的生物信息学分析 | 第73-76页 |
| ·小结与讨论 | 第76-78页 |
| 第六章 植酸酶phyC基因的原核表达及酶学性质分析 | 第78-96页 |
| ·材料和药品 | 第78-81页 |
| ·菌株和质粒 | 第78页 |
| ·试剂和药品 | 第78-79页 |
| ·主要培养基 | 第79页 |
| ·主要溶液 | 第79-80页 |
| ·实验仪器与设备 | 第80-81页 |
| ·实验方法 | 第81-86页 |
| ·PCR引物的设计 | 第81页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第81-83页 |
| ·目的基因诱导表达 | 第83页 |
| ·诱导表达条件的单因素试验 | 第83页 |
| ·样品的SDS-PAGE分析 | 第83-85页 |
| ·表达蛋白的分离纯化 | 第85页 |
| ·纯化蛋白的酶活性测定 | 第85-86页 |
| ·重组植酸酶的部分酶学性质分析 | 第86页 |
| ·结果与分析 | 第86-94页 |
| ·芽孢杆菌植酸酶phyC基因成熟肽片段的克隆 | 第86-87页 |
| ·pET28a-phyC原核表达载体的构建 | 第87-90页 |
| ·重组芽孢杆菌中性植酸酶的诱导表达 | 第90页 |
| ·重组芽孢杆菌中性植酸酶蛋白诱导表达条件的优化 | 第90-92页 |
| ·重组芽孢杆菌中性植酸酶蛋白的纯化 | 第92页 |
| ·纯化重组芽孢杆菌中性植酸酶的酶学性质 | 第92-94页 |
| ·小结与讨论 | 第94-96页 |
| 第七章 植酸酶PhyC基因的真核表达及酶学性质分析 | 第96-114页 |
| ·材料和药品 | 第96-99页 |
| ·菌株和质粒 | 第96页 |
| ·试剂和药品 | 第96-97页 |
| ·主要培养基 | 第97页 |
| ·主要溶液及试剂 | 第97-99页 |
| ·实验仪器与设备 | 第99页 |
| ·实验方法 | 第99-106页 |
| ·芽孢杆菌植酸酶phyC基因pPIC9K表达片段的克隆 | 第99-100页 |
| ·植酸酶phyC基因pPIC9K表达载体的构建 | 第100-102页 |
| ·表达载体的电击转化 | 第102-103页 |
| ·重组酵母转化子的筛选 | 第103-104页 |
| ·植酸酶phyC基因在P. pastoris GS115中的表达 | 第104-105页 |
| ·植酸酶蛋白的纯化及酶学性质分析 | 第105-106页 |
| ·结果与分析 | 第106-112页 |
| ·植酸酶phyC基因pPIC9K表达片段的获得 | 第106-107页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第107页 |
| ·酵母重组子的筛选 | 第107-108页 |
| ·植酸酶蛋白的诱导表达 | 第108-109页 |
| ·表达上清液的酶活性测定 | 第109页 |
| ·带组氨酸标签植酸酶蛋白的诱导表达及纯化 | 第109-110页 |
| ·表达蛋白的部分酶学性质分析 | 第110-112页 |
| ·小结与讨论 | 第112-114页 |
| 第八章 植酸酶phyC基因对桑树遗传转化的研究 | 第114-142页 |
| ·材料和药品 | 第114-118页 |
| ·植物材料 | 第114页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第114页 |
| ·主要试剂和药品 | 第114-115页 |
| ·主要培养基 | 第115页 |
| ·主要溶液的配制 | 第115-117页 |
| ·主要仪器 | 第117-118页 |
| ·组织培养的条件 | 第118页 |
| ·实验方法 | 第118-126页 |
| ·植物培养基的配制(500 mL) | 第118页 |
| ·桑种子不同萌芽方式的对比 | 第118-119页 |
| ·桑树组培不定芽对卡那霉素的敏感性试验 | 第119页 |
| ·pCAMBIA-2300-phyC基因转化载体的构建 | 第119-122页 |
| ·pCAMBIA-2300-phyC质粒转化农杆菌 | 第122-123页 |
| ·农杆菌介导桑丛生芽的遗传转化 | 第123-125页 |
| ·花粉介导的遗传转化 | 第125页 |
| ·基因转化桑苗的PCR检测 | 第125-126页 |
| ·结果与分析 | 第126-139页 |
| ·不同处理方式对桑种子萌芽的影响 | 第126-127页 |
| ·不同处理方式对外植体接种的影响 | 第127-128页 |
| ·桑树丛生芽的获得 | 第128页 |
| ·桑树不定芽对卡那霉素耐受浓度的确定 | 第128-130页 |
| ·pCAMBIA-2300-phyC载体的构建策略 | 第130-134页 |
| ·农杆菌工程菌的获得 | 第134-135页 |
| ·基因转化桑苗的获得 | 第135-136页 |
| ·花粉介导的遗传转化 | 第136-137页 |
| ·基因转化桑苗的鉴定 | 第137-139页 |
| ·小结与讨论 | 第139-142页 |
| 第九章 总结 | 第142-144页 |
| ·桑叶植酸含量及五龄家蚕蚕粪植酸含量的研究 | 第142页 |
| ·枯草芽孢杆菌的获得与基因克隆研究 | 第142页 |
| ·中性植酸酶phyC基因的原核与真核表达及酶学性质研究 | 第142-143页 |
| ·桑树组培外植体的获得及卡那霉素浓度的确定研究 | 第143页 |
| ·利用农杆菌介导与花粉介导法进行phyC基因转化桑树的研究 | 第143-144页 |
| 论文的创新性 | 第144-146页 |
| 参考文献 | 第146-154页 |
| 博士在读期间发表文章及参加课题情况 | 第154-156页 |
| 致谢 | 第156页 |
