摘要 | 第1-13页 |
Abstract | 第13-16页 |
前言 | 第16-20页 |
第一部分 粉尘螨Ⅰ类变应原 ProDer f 1 经 MHC-Ⅱ通路的载体构建表达与纯化 | 第20-53页 |
1. 研究内容 | 第20页 |
2. 材料与方法 | 第20-31页 |
·质粒和引物 | 第20-21页 |
·主要试剂 | 第21-23页 |
·主要仪器设备 | 第23-25页 |
·主要试剂配制 | 第25-31页 |
3. 实验方法 | 第31-43页 |
·重组质粒的提取 | 第31-32页 |
·pET-28a(+)-ProDer f 1 重组质粒的双酶切鉴定 | 第32-33页 |
·pET28a(+)-DCP 载体的构建 | 第33-35页 |
·pET28a(+)-DCP 菌落 PCR、筛选阳性菌及测序 | 第35页 |
·pET28a(+)-DCP-IhC 载体的构建 | 第35-37页 |
·pET28a(+)-DCP-ProDer f 1、pET28a(+)-DCP-IhC-ProDer f 1 的构建及酶切鉴定 | 第37页 |
·ProDer f 1、DCP- ProDer f 1、DCP-IhC- ProDer f 1 蛋白的小量诱导表达 | 第37-38页 |
·ProDer f 1、DCP-ProDer f 1、DCP-IhC-ProDer f 1 蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第38-39页 |
·ProDer f 1、DCP- ProDer f 1、DCP-IhC- ProDer f 1 蛋白的大量诱导表达 | 第39-40页 |
·ProDer f 1、DCP- ProDer f 1、DCP-IhC- ProDer f 1 蛋白的纯化及鉴定 | 第40-41页 |
·纯化产物的免疫印记(Western blot)分析 | 第41页 |
·Bradford’s 法定量蛋白浓度 | 第41-43页 |
结果 | 第43-51页 |
1. 质粒 pET-28a(+)-ProDer f 1 的酶切鉴定 | 第44-45页 |
2. 质粒 pET28a(+)-DCP 及 pET28a(+)-DCP-IhC 的酶切及测序结果 | 第45页 |
3. 质粒 pET-28a(+)-DCP-ProDer f 1、 pET28a(+)-DCP-IhC-ProDer f 1酶切鉴定 | 第45-46页 |
4. ProDer f 1、DCP- ProDer f 1、DCP-IhC- ProDer f 1 蛋白的 SDS-PAGE分析 | 第46-49页 |
5. ProDer f 1、DCP-ProDer f 1 和 DCP-IhC-ProDer f 1 重组蛋白的纯化 | 第49页 |
6. 纯化产物的免疫印迹(Western blot)鉴定 | 第49-50页 |
7. 重组蛋白浓度测定 | 第50-51页 |
讨论 | 第51-53页 |
第二部分 DCP-ProDer f 1、DCP-IhC-ProDer f 1 重组蛋白对哮喘小鼠免疫治疗的效果分析 | 第53-68页 |
1. 研究内容 | 第53页 |
2. 材料与方法 | 第53-57页 |
·材料与试剂 | 第53-55页 |
·实验方法 | 第55-57页 |
3. 统计学方法 | 第57-58页 |
结果 | 第58-65页 |
1. 各组小鼠症状和体征的改变 | 第58页 |
2. ELISA 法测定血清中特异性 IgE、IgG1和 IgG2a的含量 | 第58-60页 |
3. ELISA 法测定脾细胞培养上清液中抗原特异性 IL-4、IL-10、IL-17 和IFN-γ的含量 | 第60-62页 |
4. 肺组织切片 HE 染色 | 第62-63页 |
5. ELISA 法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中特异性细胞因子 IL-4、IL-10、IL-17 和 IFN-γ的含量 | 第63-65页 |
讨论 | 第65-68页 |
结论 | 第68-69页 |
参考文献 | 第69-75页 |
综述 | 第75-88页 |
参考文献 | 第82-88页 |
作者简介及读研期间主要科研成果 | 第88-89页 |
致谢 | 第89-90页 |