| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-19页 |
| ·维生素B_(12)生物合成及其调控研究进展 | 第9-11页 |
| ·维生素B_(12)发现、结构及功能简介 | 第9-10页 |
| ·维生素B_(12)生物合成 | 第10-11页 |
| ·维生素B_(12)生物合成的调控 | 第11-14页 |
| ·关于维生素B_(12)生物合成的基因工程 | 第14-16页 |
| ·维生素B_(12)合成相关基因 | 第14页 |
| ·维生素B_(12)基因工程现状 | 第14-16页 |
| ·基因敲除技术简介及研究进展 | 第16-19页 |
| ·基因敲除的概念及原理 | 第16页 |
| ·基因敲除技术在微生物育种中的应用 | 第16-19页 |
| 第2章 维生素B_(12)生物合成cbiB基因及P138启动子克隆 | 第19-31页 |
| ·前言 | 第19-21页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·质粒及菌株 | 第21页 |
| ·常用生化试剂及酶 | 第21-22页 |
| ·实验仪器 | 第22-23页 |
| ·生化试剂及培养基配制 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| ·大肠杆菌感受态制备及转化 | 第23-24页 |
| ·质粒提取 | 第24页 |
| ·PCR操作方法 | 第24-25页 |
| ·琼脂凝胶电泳 | 第25-26页 |
| ·DNA纯化 | 第26-27页 |
| ·P138-cbiB融合基因PCR实验步骤 | 第27-28页 |
| ·P138启动子基因克隆 | 第27-28页 |
| ·P138-cbiB融合基因PCR | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-30页 |
| ·P138启动子与cbiB基因PCR扩增结果 | 第28-29页 |
| ·P138-cbiB融合基因PCR结果 | 第29-30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 第3章 维生素B_(12)生物合成核糖开关敲除载体的构建 | 第31-39页 |
| ·前言 | 第31-33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·质粒及菌株 | 第33页 |
| ·常用生化试剂及酶 | 第33页 |
| ·试剂及仪器 | 第33页 |
| ·生化试剂及培养基配制 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第33-34页 |
| ·提取基因组DNA | 第34页 |
| ·利用DNA Polymerase克隆ermE基因PCR | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第35页 |
| ·质粒提取及凝胶电泳鉴定 | 第35页 |
| ·构建维生素B_(12)生物合成核糖开关敲除载体的技术流程 | 第35-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-38页 |
| ·ermE基因扩增结果 | 第37页 |
| ·质粒pT-PCB酶切结果 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆质粒pT-PCBE的PCR验证结果 | 第38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第4章 基因工程菌的构建及鉴定 | 第39-49页 |
| ·前言 | 第39页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·质粒及菌株 | 第39-40页 |
| ·常用生化试剂及酶 | 第40页 |
| ·试剂及仪器 | 第40页 |
| ·培养基及生化试剂配制 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-43页 |
| ·野生型谢氏丙酸菌的培养及感受态制备 | 第41页 |
| ·转化及筛选方法 | 第41-43页 |
| ·实验路线 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-47页 |
| ·电转化结果 | 第44-45页 |
| ·阳性克隆的PCR筛选结果 | 第45-47页 |
| ·小结 | 第47-49页 |
| 第5章 维生素B_(12)的发酵 | 第49-55页 |
| ·前言 | 第49页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·实验菌种 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-50页 |
| ·菌体湿重的测定 | 第49页 |
| ·培养方法 | 第49页 |
| ·酵液样品的制备 | 第49-50页 |
| ·标准样品溶液的制备 | 第50页 |
| ·色谱操作条件 | 第50页 |
| ·维生素B_(12)发酵 | 第50-51页 |
| ·实验结果与讨论 | 第51-53页 |
| ·检测波长的确定 | 第51页 |
| ·线性关系 | 第51-52页 |
| ·样品测定 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
