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斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型基因组DNA复制原点及ORF63基因分析

英文缩写符号及中英文对照表第1-11页
中文摘要第11-13页
Abstract第13-15页
1 引言第15-36页
   ·斜纹夜蛾及其防治第15-17页
     ·农林害虫斜纹夜蛾第15-16页
     ·斜纹夜蛾的防治第16-17页
   ·杆状病毒概述第17-20页
     ·杆状病毒的分类第17页
     ·杆状病毒的形态和结构第17-18页
     ·杆状病毒的生活周期第18-20页
   ·杆状病毒基因组研究第20-26页
     ·杆状病毒基因组结构第20-21页
     ·杆状病毒基因组 DNA 的复制机构第21-25页
       ·杆状病毒复制原点第21-23页
       ·与病毒 DNA 复制相关保守基因第23-25页
     ·基因组的重组第25-26页
   ·杆状病毒的基因研究第26-29页
     ·杆状病毒的基因结构第26-27页
       ·启动子基序第26-27页
       ·非翻译区第27页
       ·开放阅读框(ORFs)第27页
     ·杆状病毒基因及其功能第27-29页
   ·杆状病毒的应用研究第29-32页
     ·杆状病毒可作为载体表达系统第29-30页
     ·杆状病毒可作为生物杀虫剂第30-31页
     ·杆状病毒可用于基因治疗第31页
     ·杆状病毒可作为表面展示系统第31-32页
     ·杆状病毒表达系统的不足和展望第32页
   ·研究目的与研究内容第32-36页
     ·研究目的及意义第32-33页
     ·研究内容第33-35页
     ·技术路线第35-36页
2 材料与方法第36-53页
   ·材料第36-43页
     ·昆虫、病毒株和细胞系第36页
     ·质粒载体和受体菌第36页
     ·酶和主要试剂第36页
     ·常用试剂配制第36-41页
     ·PCR 引物第41页
     ·主要仪器设备第41-43页
   ·方法第43-53页
     ·生物信息学分析第43页
       ·生物软件资源第43页
       ·生物信息学网络资源第43页
       ·序列比对和同源性分析第43页
     ·基因组 DNA 的提取第43-44页
     ·基因片段的 PCR 扩增第44页
     ·PCR 产物的回收第44页
     ·连接反应第44-45页
     ·感受态细胞的制备(CaCl2 法)第45页
     ·重组质粒的转化第45页
     ·重组质粒的筛选(快速细胞破碎法)第45页
     ·碱裂解法少量制备质粒 DNA第45-46页
     ·酶切鉴定反应第46页
     ·融合蛋白的诱导表达第46页
     ·表达产物存在形式的检测第46页
     ·SDS-PAGE 蛋白电泳第46-47页
     ·重组蛋白的大量诱导表达第47页
     ·包涵体蛋白样品的处理第47页
     ·融合蛋白的纯化第47-48页
     ·Ni 柱的再生第48页
     ·蛋白浓度的测定(Bradford 法)第48页
     ·融合蛋白的质谱鉴定第48页
     ·多克隆抗体的制备第48-49页
     ·多克隆抗体效价的测定(ELlSA 法)第49页
     ·各时相总 RNA 的提取和反转录第49页
     ·Realtime PCR 和标准曲线制作第49-50页
     ·昆虫细胞的传代与培养第50页
     ·细胞的冻存第50页
     ·细胞的复苏第50页
     ·脂质体介导的功能质粒在昆虫细胞系中的转染与瞬时表达第50-51页
     ·萤光素酶标记的启动子活性分析第51页
     ·细胞总 DNA 的抽提及定量第51页
     ·总蛋白质的提取及定量第51-52页
     ·Western Blot 检测第52页
     ·免疫荧光细胞化学第52-53页
3 结果与分析第53-94页
   ·同源重复区(hrs)功能分析第53-64页
     ·hrs 生物信息学分析第53-58页
     ·hrs 功能质粒的构建第58-60页
     ·hrs 复制功能分析第60-61页
     ·hrs 增强功能分析第61-62页
     ·64bp 回文序列功能分析第62-63页
     ·hrs 特征结构与复制增强效率的相互关系第63-64页
   ·ORF63 生物信息学分析第64-73页
     ·序列分析第64-65页
     ·保守结构域分析第65页
     ·同源性分析第65-67页
     ·信号肽分析第67-68页
     ·GP63 的跨膜结构域分析第68-69页
     ·疏水性分析第69-70页
     ·功能结构域分析第70页
     ·磷酸化、糖基化位点预测第70-71页
     ·二级结构分析第71页
     ·卷曲螺旋分析第71-73页
   ·ORF63 启动子活性与转录时相分析第73-80页
     ·启动子特征基序分析第73页
     ·功能质粒的构建第73-74页
     ·启动子活性分析第74-75页
     ·ORF63 在细胞中转录时相分析第75-78页
     ·ORF63 在宿主中转录时相分析第78-80页
   ·ORF63 原核表达与抗体制备第80-85页
     ·ORF63 重组质粒构建第80-81页
     ·ORF63 原核表达第81页
     ·ORF63 融合蛋白的纯化第81-83页
     ·ORF63 融合蛋白的质谱鉴定第83页
     ·ORF63 蛋白质浓度测定第83-84页
     ·多克隆抗体制备及效价检测第84-85页
   ·ORF63 表达时相与亚细胞定分析第85-94页
     ·ORF63 在宿主中表达时相分析第85-86页
     ·ORF63 在细胞中表达时相分析第86页
     ·ORF63 亚细胞定位分析第86-88页
     ·ORF6、ORF57 和 ORF146 等亚细胞定位分析第88-94页
4 讨论第94-98页
   ·杆状病毒基因组 DNA 复制原点分析第94-95页
   ·ORF63 转录时相分析第95-96页
   ·ORF63 表达时相分析第96页
   ·ORF63 亚细胞定位分析第96-98页
5 结论第98-100页
6 参考文献第100-111页
7 致谢第111-112页
8 攻读学位期间发表的主要论文第112页

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