| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-76页 |
| ·ErbB家族蛋白成员的生物学功能 | 第12-23页 |
| ·ErbB2及ErbB家族概述 | 第12-14页 |
| ·ErbB受体家族二聚化和活化 | 第14-16页 |
| ·ErbB家族受体介导的信号转导 | 第16-19页 |
| ·ErbB家族受体循环 | 第19-21页 |
| 参考文献 | 第21-23页 |
| ·ErbB2过表达导致肿瘤发生的分子学机制 | 第23-32页 |
| ·ErbB家族蛋白过表达与肿瘤发生 | 第23-25页 |
| ·ErbB2过表达引起受体异常活化和信号转导 | 第25页 |
| ·ErbB2过表达影响细胞周期调控 | 第25-26页 |
| ·ErbB2过表达和细胞凋亡 | 第26页 |
| ·ErbB2受体胞外区切割及持续活化 | 第26-27页 |
| ·ErbB2过表达和ErbB家族受体循环特性的改变 | 第27页 |
| ·ErbB2过表达促进肿瘤的浸润和迁移 | 第27-29页 |
| 参考文献 | 第29-32页 |
| ·针对ErbB家族的肿瘤治疗和抗ErbB2抗体药物的开发 | 第32-43页 |
| ·抗ErbB2抗体研究进展及其在肿瘤诊断和治疗中的应用 | 第32-34页 |
| ·抗ErbB2抗体的作用机理和生物学活性 | 第34-35页 |
| ·抗ErbB2抗体的肿瘤抑制活性与受体内吞和下调的关系 | 第35-36页 |
| ·本实验室制备的抑制型抗ErbB2抗体A21 | 第36-38页 |
| 参考文献 | 第38-43页 |
| ·常见抗体展示系统概要 | 第43-56页 |
| ·噬菌体展示系统 | 第44-47页 |
| ·核糖体及mRNA展示系统 | 第47-49页 |
| ·酵母展示系统 | 第49-50页 |
| ·哺乳细胞表面展示系统 | 第50-51页 |
| ·其他展示系统 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| ·抗体库的构建和亲和力成熟策略 | 第56-64页 |
| ·工程抗体的多种形式 | 第56-57页 |
| ·抗体库和抗体亲和力成熟 | 第57-58页 |
| ·抗体亲和力成熟突变策略 | 第58-59页 |
| ·突变噬菌体抗体库的筛选和洗脱策略 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| ·高通量合成和测序概要 | 第64-76页 |
| ·合成生物学和新一代合成技术 | 第64-66页 |
| ·高通量测序技术概要 | 第66-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第76-92页 |
| ·实验材料,仪器和试剂 | 第76页 |
| ·实验方法 | 第76-92页 |
| ·A21突变位点的选择和设计 | 第76-77页 |
| ·6个CDR区突变序列的高通量合成和PCR扩增 | 第77页 |
| ·6个CDR区突变抗体库的构建 | 第77-78页 |
| ·XL10超级感受态的制备和突变库的转化 | 第78页 |
| ·突变库噬菌体库的制备 | 第78-79页 |
| ·噬菌体的滴度测定 | 第79-80页 |
| ·P185真核抗原的制备 | 第80-82页 |
| ·P185原核抗原的制备 | 第82页 |
| ·突变噬菌体库的液相筛选 | 第82-83页 |
| ·突变噬菌体库的固相筛选 | 第83页 |
| ·筛选到的阳性克隆的检测(screening) | 第83-85页 |
| ·HB2151表达可溶性抗体和周质腔抽提 | 第85页 |
| ·Western-blotting比较表达量和ELISA判定相对亲和力 | 第85-86页 |
| ·SPR测定各突变体周质腔提取物的相对亲和力 | 第86页 |
| ·亚克隆突变体,真核表达,测定相对亲和力 | 第86-88页 |
| ·突变体真核表达产物的纯化和亲和力测定 | 第88页 |
| ·丙氨酸扫描(alaning scanning)分析抗体上结合表位的重要残基 | 第88-89页 |
| ·真核细胞表面展示(mammalian cell display) | 第89-92页 |
| 第三章 实验结果 | 第92-126页 |
| ·前期研究背景及噬菌体系统 | 第92-93页 |
| ·丙氨酸扫描决定优先突变的抗体关键残基 | 第93-94页 |
| ·传统法构建突变库的条件优化和载体酶切位点的改造 | 第94-96页 |
| ·基于生物信息学和高通量技术的新噬菌体库的构建 | 第96-100页 |
| ·基于信息学的突变库的设计 | 第96-98页 |
| ·CDRs突变序列的高通量芯片合成 | 第98-99页 |
| ·芯片合成的CDRs突变序列的扩增和突变库的构建 | 第99-100页 |
| ·A21CDR区突变单链抗体库的构建和质量控制 | 第100-102页 |
| ·噬菌体突变库筛选条件的研究 | 第102-104页 |
| ·固相法筛选 | 第102-103页 |
| ·液相法筛选 | 第103-104页 |
| ·6个CDR区突变噬菌体库的筛选结果 | 第104-106页 |
| ·对筛选到的阳性克隆的相对亲和力测定 | 第106-108页 |
| ·各CDR区突变库阳性克隆的序列分析 | 第108-110页 |
| ·五个CDR区组合库的设计和构建 | 第110-112页 |
| ·组合噬菌体库的多轮筛选和突变体相对亲和力测定 | 第112-116页 |
| ·SPR测定野生型单链抗体以及突变体C2C10B亲和力 | 第116-117页 |
| ·含VH CDR3的组合突变库的构建和高通量测序分析 | 第117-119页 |
| ·哺乳动物细胞表面展示条件的初步摸索 | 第119-121页 |
| ·筛选和检测用抗原的制备 | 第121-126页 |
| 第四章 讨论 | 第126-135页 |
| ·传统噬菌体展示技术和建库新策略的比较 | 第126-127页 |
| ·高通量测序和筛选突变序列的分析 | 第127-129页 |
| ·对组合库的三轮筛选所得结果的分析 | 第129-131页 |
| ·噬菌体库筛选条件的比较 | 第131-133页 |
| ·固相筛选和洗脱条件 | 第131-132页 |
| ·液相筛选和洗脱条件 | 第132-133页 |
| ·快速比较突变克隆亲和力高低的方法摸索 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-138页 |
| 附录 | 第138-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第144页 |
