| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 英文缩略语表 | 第12-13页 |
| 1. 文献综述 | 第13-25页 |
| ·非洲猪瘟的历史及流行病学 | 第13-15页 |
| ·非洲猪瘟的历史 | 第13-14页 |
| ·非洲猪瘟的流行病学 | 第14-15页 |
| ·非洲猪瘟的病原学特性 | 第15-16页 |
| ·病毒的分类、形态与结构 | 第15页 |
| ·基因组的结构与功能 | 第15-16页 |
| ·非洲猪瘟病毒的理化特性 | 第16页 |
| ·非洲猪瘟的临床症状和病理变化 | 第16-17页 |
| ·非洲猪瘟的临床症状 | 第16-17页 |
| ·非洲猪瘟的病理变化 | 第17页 |
| ·非洲猪瘟实验室诊断技术 | 第17-20页 |
| ·病原学诊断技术 | 第17-19页 |
| ·清学诊断技术 | 第19-20页 |
| ·非洲猪瘟疫苗研究进展 | 第20-21页 |
| ·杆状病毒表达载体系统研究进展 | 第21-25页 |
| ·杆状病毒表达载体系统简介 | 第21-22页 |
| ·杆状病毒介导外源基因在哺乳动物细胞中的表达 | 第22-23页 |
| ·杆状病毒载体疫苗的应用 | 第23-25页 |
| 2. 研究目的与意义 | 第25-27页 |
| 3. 实验材料 | 第27-31页 |
| ·细胞、菌种、毒株、质粒与实验动物 | 第27页 |
| ·血清样品 | 第27页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第27页 |
| ·培养基、缓冲液的配制 | 第27-29页 |
| ·主要试验材料及仪器 | 第29-31页 |
| 4. 实验方法 | 第31-38页 |
| ·非洲猪瘟病毒VP73蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备 | 第31-34页 |
| ·VP73蛋白的诱导表达 | 第31页 |
| ·诱导表达产物的SDS-PAGE分析 | 第31页 |
| ·诱导表达产物的Western blot分析 | 第31-32页 |
| ·蛋白纯化 | 第32页 |
| ·小鼠免疫实验 | 第32页 |
| ·免疫小鼠血清抗体效价测定 | 第32页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选及克隆化 | 第32-33页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备 | 第33页 |
| ·单克隆抗体的效价测定 | 第33页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第33页 |
| ·单克隆抗体与VP73原核表达蛋白的Western blot分析 | 第33页 |
| ·脂质体介导的转染法 | 第33-34页 |
| ·单克隆抗体的间接免疫荧光(IFA)分析 | 第34页 |
| ·单克隆抗体与VP73真核表达蛋白的Western blot分析 | 第34页 |
| ·非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法的建立 | 第34-36页 |
| ·间接ELISA反应条件的优化及反应程序 | 第34页 |
| ·阴阳性判定标准的确定 | 第34-35页 |
| ·敏感性试验 | 第35页 |
| ·特异性试验 | 第35页 |
| ·重复性试验 | 第35页 |
| ·稳定性试验 | 第35页 |
| ·保存期试验 | 第35页 |
| ·间接ELISA抗体检测方法的临床应用(符合率实验) | 第35-36页 |
| ·非洲猪瘟病毒VP73基因杆状病毒载体疫苗的构建 | 第36-38页 |
| ·真核表达质粒(pcDNA-VP73)的构建 | 第36页 |
| ·重组转移载体(pFastBac-G-VP73)的构建 | 第36页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid-G-VP73)的构建 | 第36页 |
| ·重组穿梭载体基因组的提取 | 第36-37页 |
| ·重组杆状病毒获得 | 第37页 |
| ·重组杆状病毒AcNPV-G-VP73的纯化与毒价的测定 | 第37页 |
| ·重组杆状病毒转导BHK-21细胞 | 第37页 |
| ·Western blot检测目的蛋白的表达 | 第37-38页 |
| 5. 结果与分析 | 第38-50页 |
| ·非洲猪瘟病毒VP73蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备 | 第38-41页 |
| ·诱导表达产物的SDS-PAGE分析 | 第38页 |
| ·诱导表达产物的Western blot分析 | 第38-39页 |
| ·蛋白纯化 | 第39页 |
| ·免疫小鼠血清抗体效价测定 | 第39页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选及克隆化 | 第39页 |
| ·单克隆抗体的效价测定 | 第39-40页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第40页 |
| ·单克隆抗体与VP73原核表达蛋白的Western blot分析 | 第40页 |
| ·单克隆抗体的间接免疫荧光(IFA)分析 | 第40-41页 |
| ·单克隆抗体与VP73真核表达蛋白的Western blot分析 | 第41页 |
| ·非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法的建立 | 第41-45页 |
| ·间接ELISA抗体检测方法反应条件的确立 | 第41-42页 |
| ·阴阳性判定标准的确定 | 第42页 |
| ·敏感性试验 | 第42-43页 |
| ·特异性试验 | 第43页 |
| ·重复性试验 | 第43-44页 |
| ·稳定性试验 | 第44页 |
| ·保存期试验 | 第44-45页 |
| ·间接ELISA抗体检测方法的临床应用(符合率实验) | 第45页 |
| ·非洲猪瘟病毒VP73基因杆状病毒载体疫苗的构建 | 第45-50页 |
| ·真核表达质粒(pcDNA-VP73)的构建 | 第45-46页 |
| ·重组转移载体(pFastBac-G-VP73)的构建 | 第46-47页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid-G-VP73)的构建 | 第47-48页 |
| ·重组杆状病毒获得 | 第48-49页 |
| ·重组杆状病毒AcNPV-G-VP73的纯化与毒价的测定 | 第49页 |
| ·重组杆状病毒AcNPV-G-VP73介导VP73基因在BHK-21细胞中的表达 | 第49-50页 |
| 6. 讨论 | 第50-57页 |
| ·以VP73基因作为研究对象的可行性 | 第50页 |
| ·VP73序列的选取及蛋白纯化 | 第50-51页 |
| ·单克隆抗体的制备及筛选 | 第51-52页 |
| ·非洲猪瘟无疫区建立血清学检测方法的必要性及可行性 | 第52-54页 |
| ·构建ELISA方法的影响因素 | 第54-55页 |
| ·杆状病毒表达系统介导外源基因在哺乳动物细胞中的表达 | 第55页 |
| ·影响重组杆状病毒转导哺乳动物细胞效率和外源基因表达量的因素 | 第55-57页 |
| 7. 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
