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靶序列模拟技术在抗CMV中的作用研究

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
缩略词表第11-12页
目录第12-14页
第一章 绪论第14-24页
   ·黄瓜花叶病毒概述第14-17页
     ·黄瓜花叶病毒生物学特性第14页
     ·黄瓜花叶病毒病毒结构及基因组功能第14-16页
     ·黄瓜花叶病毒的变异及分组第16-17页
   ·黄瓜花叶病毒的防治第17-18页
   ·植物中MicroRNA的研究进展第18-22页
     ·植物中RNA沉默现象第18页
     ·Mirco RNA的发现与产生机制第18-20页
     ·Mirco RNA的生物学功能第20-21页
     ·MircoRNA的人工模拟靶序列概述第21页
     ·人工MircoRN A(Artificial microRNA, a miRNA)的研究进展第21-22页
     ·抗病毒研究方法和进展第22页
   ·研究内容与意义第22-24页
     ·研究内容第22-23页
     ·研究意义第23-24页
第二章 模拟靶序列对CMV-GFP中报告基因的抑制效果检测第24-44页
   ·材料与方法第24-34页
     ·植物材料第24页
     ·酶与试剂第24页
     ·常用试剂的配制第24页
     ·LS-RNA3-GFP-MIMIC克隆的构建第24-29页
     ·LS-CMV-GFP-MIMIC克隆的农杆菌转化与浸润接种第29-31页
     ·模拟靶序列影响LS-CMV-GFP 中GFP表达量的Western Blot检测第31-32页
     ·Fny-RNA3-GFP-MIMIC的克隆构建第32-34页
     ·Fny-RNA3-GFP -MIMIC克隆的农杆菌转化与浸润接种第34页
     ·Fny-RNA3-GFP –MIMIC的Western Blot检测第34页
   ·结果与分析第34-43页
     ·LS-RNA 3-GFP-MIM隆的构建第34-36页
     ·模拟靶序列对 LS-CMV-GFP 中GFP表达量的影响第36-38页
     ·模拟靶序列影响LS-CMV-GFP 中GFP表达量的W estern Blot印迹结果与分析第38-39页
     ·Fny-RNA3-GFP-MIMIC克隆的构建第39-41页
     ·模拟靶序列影响Fny -CMV-GFP 中GFP表达量的荧光结果及分析第41-42页
     ·模拟靶序列影响Fny-CMV-GFP 中GFP表达量的WesternBlot印迹结果与分析第42-43页
   ·小结与讨论第43-44页
第三章 靶序列模拟对CMV负链合成和翻译水平的影响第44-52页
   ·材料与方法第44-48页
     ·植物材料第44页
     ·酶与试剂第44页
     ·常用试剂的配制第44页
     ·pBI-EGFP-UTR克隆的构建第44-46页
     ·pBI-EGFP-UTR克隆的农杆菌转化与浸润接种第46页
     ·EGFP-UTR的Western Blot检测第46页
     ·RT-PCR检测第46-48页
   ·结果与分析第48-51页
     ·模拟靶序列对CMV翻译水平的影响第48-49页
     ·模拟靶序列抑制CMV翻译水平的Western Blot印迹结果与分析第49-50页
     ·模拟靶序列对CMV负链合成的影响第50-51页
   ·小结与讨论第51-52页
第四章 模拟靶序列对CMV完整病毒积累量的抑制效果第52-65页
   ·材料与方法第52-59页
     ·植物材料第52页
     ·酶与试剂第52页
     ·常用试剂的配制第52页
     ·LS-CMV-MIMIC的克隆构建第52-54页
     ·LS-CMV-MIMIC的克隆体外转录与病毒扩繁第54-56页
     ·LS-CMV-MIMIC的Northern Blot检测第56-58页
     ·模拟靶序列位于Fny不同基因组的克隆构建第58页
     ·Fny-CMV-MIMIC克隆的农杆菌转化、浸润接种与病毒扩繁第58-59页
     ·Fny-CMV-MIMIC的Northern Blot检测第59页
   ·结果与分析第59-64页
     ·miRNA与模拟靶序列互作的症状表现第59-61页
     ·LS-CMV-MIMIC在拟南芥上的接种症状第61页
     ·模拟靶序列对LS-CMV重组病毒积累的影响第61-62页
     ·模拟靶序列对Fny-CMV病毒症状的影响第62-63页
     ·Fny -CMV-MIMIC的Northern Blot印迹结果第63-64页
   ·小结与讨论第64-65页
总结和展望第65-66页
参考文献第66-71页
附录:重要溶剂配制第71-73页
致谢第73页

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