| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语的中英文对照 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-44页 |
| 第一章 肌肉生长抑制素(MYOSTATIN)基因的研究进展 | 第12-22页 |
| 1. MSTN基因的起源 | 第12-13页 |
| 2. MSTN基因的结构 | 第13-15页 |
| 3. MSTN基因的表达规律 | 第15-17页 |
| 4. MSTN的生物学功能及其应用 | 第17-20页 |
| ·与肌肉组织的关系 | 第17-18页 |
| ·与脂肪组织的关系 | 第18-20页 |
| ·与其它组织的关系 | 第20页 |
| 5. 结论 | 第20-22页 |
| 第二章 锌指核酸酶在基因打靶中的应用 | 第22-38页 |
| 1. 锌指核酸酶 | 第22-25页 |
| ·锌指蛋白 | 第22-25页 |
| ·FOKI切割域 | 第25页 |
| 2. ZFNS介导基因敲除和插入 | 第25-30页 |
| ·DNA双链断裂的产生 | 第25页 |
| ·基因破坏 | 第25-27页 |
| ·依赖于同源性的基因组修饰 | 第27-30页 |
| 3. 基因组修饰的特异性 | 第30-32页 |
| ·ZFNs系统的优化 | 第31页 |
| ·检测ZFNs的特异性 | 第31-32页 |
| 4. ZFNS在治疗上的应用 | 第32-36页 |
| ·ZFNs在疾病治疗中的进展 | 第32-34页 |
| ·ZFNs治疗存在脱靶的问题 | 第34-36页 |
| 5. 结论 | 第36-38页 |
| 第三章 高效的基因组修饰工具-----TALEN | 第38-44页 |
| 1. TALES：新的DNA结合域 | 第38-40页 |
| 2. TALENS对基因组的修饰 | 第40-41页 |
| 3. TALENS的特异性及脱靶研究 | 第41-42页 |
| 4. 结论 | 第42-44页 |
| 第二部分 实验研究 | 第44-102页 |
| 第四章 ZFNS介导猪MYOSTATIN基因定点敲除的研究 | 第44-88页 |
| 1 材料与仪器 | 第45-46页 |
| ·质粒及试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-66页 |
| ·靶向猪MYOSTATIN基因ZFNs的鉴定和体外转录 | 第46-53页 |
| ·注射编码ZFN蛋白的MRNA对猪孤雌胚发育的影响 | 第53-55页 |
| ·ZFN在猪卵母细胞中介导的MYOSTATIN基因敲除的研究 | 第55-61页 |
| ·ZFN在猪胎儿成纤维细胞中介导MYOSTATIN基因敲除的研究 | 第61-66页 |
| 3 实验结果 | 第66-82页 |
| ·靶向猪MYOSTATIN基因的ZFN设计 | 第66-67页 |
| ·靶向MYOSTATIN基因的ZFNs活性验证 | 第67-68页 |
| ·ZFNs表达载体的鉴定及MRNA的体外转录 | 第68-69页 |
| ·注射MRNA对猪孤雌胚发育的影响 | 第69-71页 |
| ·MYOSTATIN基因突变检测引物的设计 | 第71页 |
| ·ZFNs介导的孤雌胚胎中MYOSTATIN基因突变的检测 | 第71-72页 |
| ·孤雌胚胎中MYOSTATIN基因的突变验证 | 第72-73页 |
| ·用T7核酸内切酶Ⅰ进行突变体的检测 | 第73-74页 |
| ·TA克隆测序检测 | 第74-76页 |
| ·ZFNs注射的猪孤雌胚胎的数据分析与统计 | 第76-79页 |
| ·细胞转染效率的对比 | 第79-80页 |
| ·ZFN蛋白的细胞定位 | 第80页 |
| ·ZFNs处理的PEF细胞中MYOSTATIN基因突变检测 | 第80-81页 |
| ·ZFN处理细胞的DNA序列分析 | 第81-82页 |
| 4 讨论 | 第82-88页 |
| ·ZFNs的设计和传递形式 | 第82-83页 |
| ·卵母细胞的发育以及注射MRNA对猪孤雌胚发育的影响 | 第83-84页 |
| ·ZFNs在猪卵母细胞中介导的基因敲除 | 第84-86页 |
| ·ZFNS在PEF细胞中介导的MYOSTATIN基因的敲除 | 第86-88页 |
| 第五章 TALENS介导猪MYOSTATIN基因定点敲除的研究 | 第88-102页 |
| 1 材料与仪器 | 第88-89页 |
| ·质粒及试剂 | 第88-89页 |
| ·主要仪器 | 第89页 |
| 2 实验方法 | 第89-91页 |
| ·靶向猪MYOSTATIN基因TALENs的鉴定和体外转录 | 第89-90页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞中TALENS的转染与效果检测 | 第90页 |
| ·猪孤雌激活胚的MRNA注射 | 第90-91页 |
| ·猪孤雌胚胎中TALENS注射的效果检测 | 第91页 |
| 3 结果分析 | 第91-97页 |
| ·靶向猪MYOSTATIN基因TALEN的设计 | 第91-92页 |
| ·TALENs表达载体的鉴定及MRNA的体外转录 | 第92-93页 |
| ·TALENs蛋白的细胞定位 | 第93-94页 |
| ·TALENs处理的猪胎儿成纤维细胞中MYOSTATIN基因突变检测 | 第94-95页 |
| ·TALENs处理细胞的MYOSTATIN基因的TA克隆测序分析 | 第95-96页 |
| ·TALENs注射的猪孤雌胚胎中MYOSTATIN基因的突变检测 | 第96-97页 |
| ·TALENs处理的猪孤雌胚胎MYOSTATIN基因的TA克隆测序分析 | 第97页 |
| 4 讨论 | 第97-102页 |
| ·TALEN的设计 | 第97-98页 |
| ·不同条件下TALEN的切割效率 | 第98页 |
| ·不同条件下突变的检测效率 | 第98-99页 |
| ·TALEN与ZFN在细胞和胚胎水平上切割活性的比较 | 第99-102页 |
| 全文结论 | 第102-104页 |
| 创新点 | 第104-106页 |
| 附录 | 第106-110页 |
| 参考文献 | 第110-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
