| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 缩略词 | 第9-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-32页 |
| ·染色质概述 | 第12-19页 |
| ·真核生物的核小体结构 | 第13-14页 |
| ·古菌的染色体DNA组装、染色质结构及其修饰 | 第14-19页 |
| ·组蛋白修饰及对染色质的动态调节 | 第19-30页 |
| ·组蛋白的甲基化修饰 | 第19-25页 |
| ·组蛋白的乙酰化修饰 | 第25-28页 |
| ·组蛋白其它修饰及功能(泛素化和磷酸化修饰) | 第28-29页 |
| ·原核染色质蛋白及其修饰 | 第29-30页 |
| ·本论文的研究内容和意义 | 第30-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-44页 |
| ·酶、试剂和抗体 | 第32页 |
| ·pET28a-aKMT4载体构建 | 第32页 |
| ·pET28a-aKMT4-G38R突变载体的构建 | 第32-33页 |
| ·可溶性GST融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第33-34页 |
| ·可溶性His融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第34-35页 |
| ·体外甲基化反应 | 第35-36页 |
| ·非变性凝胶电泳分析甲基转移酶与底物的体外相互作用 | 第36-37页 |
| ·古菌基因组DNA的提取 | 第37页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第37-39页 |
| ·蛋白质含量测定法(Folin-酚法) | 第39-40页 |
| ·蛋白的超滤和透析 | 第40-41页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第41-42页 |
| ·抗体的提取与纯化 | 第42页 |
| ·质谱分析甲基化修饰位点 | 第42-43页 |
| ·分子筛(Gel Filtration) | 第43-44页 |
| 第三章 硫化叶菌甲基转移酶aKMT4是真核生物Dot1的同源蛋白 | 第44-53页 |
| ·背景 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-52页 |
| ·aKMT4与酿酒酵母yDot1的二级和三级结构是保守的 | 第44-45页 |
| ·aKMT4甲基化修饰硫化叶菌染色质蛋白Cren7和Sul7d | 第45-47页 |
| ·yDot1和aKMT4具有类似的活性中心 | 第47-48页 |
| ·aKMT4具有结合ssDNA的能力 | 第48-49页 |
| ·aKMT4部分互补酿酒酵母yDot1的功能 | 第49-51页 |
| ·aKMT4和Sir2的进化树 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第四章 硫化叶菌甲基转移酶aKMT4的酶学特性 | 第53-62页 |
| ·背景 | 第53页 |
| ·实验结果 | 第53-61页 |
| ·底物特异性 | 第53-54页 |
| ·在温度、酶与底物不同摩尔比、pH、时间及离子等不同条件下探究aKMT4的活性 | 第54-57页 |
| ·aKMT4对两种RNA外切酶复合体作用方式不同 | 第57-58页 |
| ·aKMT4与底物相互作用很微弱 | 第58-59页 |
| ·硫化叶菌中aKMT4含量丰富,且不随生长周期和温度变化 | 第59-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 第五章 aKMT4以不同方式甲基化染色质蛋白Cren7和Su17d | 第62-68页 |
| ·背景 | 第62页 |
| ·实验结果 | 第62-67页 |
| ·aKMT4对Cren7的甲基化修饰 | 第62页 |
| ·aKMT4对Sul7d的甲基化修饰 | 第62-64页 |
| ·DNA显著促进aKMT4对Su17d的甲基化,对Cren7的甲基化影响很小 | 第64-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 第六章 aKMT4的自甲基化修饰抑制酶的活性 | 第68-72页 |
| ·背景 | 第68页 |
| ·实验结果 | 第68-71页 |
| ·aKMT4存在分子内的自甲基化修饰 | 第68页 |
| ·aKMT4的自甲基化修饰是一种稳定状态 | 第68-69页 |
| ·aKMT4的自甲基化修饰抑制酶对底物的活性 | 第69-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第七章 aKMT4能够甲基化解旋酶SisMCM | 第72-75页 |
| ·背景 | 第72页 |
| ·实验结果 | 第72-74页 |
| ·小结 | 第74-75页 |
| 第八章 讨论与展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 个人简介 | 第87-88页 |
| 附录 | 第88-91页 |
