| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 英文缩略表 | 第9-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-32页 |
| 1 烟粉虱的抗药性发展 | 第16-18页 |
| ·烟粉虱对常规杀虫剂的抗性 | 第16-17页 |
| ·烟粉虱对烟碱类和新烟碱类杀虫剂的抗性 | 第17页 |
| ·对昆虫生长调节剂的抗性 | 第17-18页 |
| 2 烟粉虱的抗药性机制 | 第18-19页 |
| ·解毒代谢酶活性增强 | 第18页 |
| ·靶标敏感性降低 | 第18页 |
| ·与新烟碱类杀虫剂相关的抗性机理 | 第18-19页 |
| ·代谢抗性 | 第18-19页 |
| ·靶标抗性 | 第19页 |
| 3 细胞色素P450氧化酶的概况 | 第19-22页 |
| ·P450的结构组成 | 第19-20页 |
| ·P450种类的多样性 | 第20页 |
| ·P450分布的多样性 | 第20页 |
| ·P450功能的多样性 | 第20-21页 |
| ·P450催化反应的多样性 | 第21页 |
| ·昆虫CYP6家族的多样性 | 第21-22页 |
| ·与抗药性有关的P450基因 | 第22页 |
| 4 RNAI技术及其应用 | 第22-31页 |
| ·RNAi作用的分子机制 | 第23-27页 |
| ·RNAi技术方法 | 第27-29页 |
| ·RNAi的应用 | 第29-31页 |
| 5 本研究的总体思路、主要内容和技术路线 | 第31-32页 |
| ·总体思路与主要内容 | 第31页 |
| ·技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 烟粉虱内参基因的筛选 | 第32-49页 |
| ·供试材料 | 第32-34页 |
| ·生物因子 | 第32-33页 |
| ·非生物因子 | 第33-34页 |
| ·供试试剂 | 第34页 |
| ·候选内参基因选择 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-38页 |
| ·总RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第35页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第35-37页 |
| ·PCR回收产物与载体连接 | 第37页 |
| ·RT-qPCR分析 | 第37-38页 |
| ·数据分析 | 第38页 |
| ·结果分析 | 第38-47页 |
| ·geNorm-分析结果 | 第41-44页 |
| ·Normfinder分析结果 | 第44-47页 |
| ·结论与讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 B型烟粉虱P450基因CYP6DZ7的克隆与序列分析 | 第49-59页 |
| ·供试材料 | 第49-50页 |
| ·供试烟粉虱 | 第49页 |
| ·供试试剂 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50页 |
| ·总RNA的提取 | 第50页 |
| ·cDNA合成方法 | 第50页 |
| ·PCR产物回收、连接转化 | 第50页 |
| ·烟粉虱P450基因CYP6DZ7的克隆 | 第50-53页 |
| ·CYP6DZ7中间片段获取 | 第50-51页 |
| ·CYP6DZ7全长基因的获取 | 第51-52页 |
| ·CYP6DZ7基因cDNA全长序列验证 | 第52-53页 |
| ·CYP6DZ7结构分析 | 第53-58页 |
| ·CYP6DZ7核酸序列分析 | 第53-55页 |
| ·CYP6DZ7蛋白二级结构其分析 | 第55-57页 |
| ·CYP6DZ7蛋白三维空间结构的分析 | 第57-58页 |
| ·小结与讨论 | 第58-59页 |
| 第四章 烟粉虱抗性品系和敏感品系中CYP6DZ7基因的表达分析 | 第59-63页 |
| ·供试烟粉虱 | 第59页 |
| ·试验方法 | 第59-61页 |
| ·RNA的提取 | 第59页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第59页 |
| ·引物设计 | 第59-60页 |
| ·实时荧光定量PCR的反应条件 | 第60-61页 |
| ·引物扩增效率及扩增产物的熔解曲线 | 第61页 |
| ·结果分析 | 第61-62页 |
| ·小结与讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 烟粉虱抗性品系P450基因龄期与组织定量表达分析 | 第63-68页 |
| ·供试昆虫 | 第63页 |
| ·试验方法 | 第63-65页 |
| ·RNA的提取 | 第63页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第63-64页 |
| ·引物设计 | 第64页 |
| ·实时荧光定量PCR反应条件 | 第64-65页 |
| ·结果分析 | 第65-66页 |
| ·小结与讨论 | 第66-68页 |
| 第六章 烟粉虱烟粉虱抗性品系与敏感品系P450基因诱导表达分析 | 第68-72页 |
| ·供试昆虫 | 第68页 |
| ·试验方法 | 第68-69页 |
| ·RNA的提取 | 第68页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第68-69页 |
| ·引物设计 | 第69页 |
| ·结果分析 | 第69-71页 |
| ·小结与讨论 | 第71-72页 |
| 第七章 显微注射构建烟粉虱的RNAI技术体系 | 第72-79页 |
| ·材料与方法 | 第72-74页 |
| ·实验昆虫 | 第72页 |
| ·CYP6CM1基因的克隆及T7启动子引物设计 | 第72-73页 |
| ·dsRNA的合成 | 第73页 |
| ·显微注射 | 第73-74页 |
| ·real-time PCR检测沉默效率 | 第74页 |
| ·数据分析 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-77页 |
| ·烟粉虱CYP6CM1基因及dsRNA基因的克隆 | 第74-75页 |
| ·注射不同浓度dsCYP6CM1后的烟粉虱在不同注射时间下的表达量的变化 | 第75页 |
| ·注射不同浓度dsCYP6CM1后的烟粉虱在24h内的羽化率变化 | 第75-76页 |
| ·注射Buffer、dsGFP和dsCYP6CM1后,烟粉虱在24h内羽化率的变化 | 第76页 |
| ·注射Buffer、dsGFP和dsCYP6CM1后,烟粉虱在不同时间内表达量的变化 | 第76-77页 |
| ·结论与讨论 | 第77-79页 |
| 第八章 利用RNAI技术揭示CYP6DZ7基因在抗性中的作用 | 第79-84页 |
| ·材料方法 | 第79-81页 |
| ·实验昆虫 | 第79页 |
| ·CYP6DZ7基因的克隆及T7启动子引物设计 | 第79-80页 |
| ·dsRNA的合成 | 第80页 |
| ·显微注射 | 第80页 |
| ·RT-qPCR检测沉默效率 | 第80-81页 |
| ·生测结果检测 | 第81页 |
| ·数据分析 | 第81页 |
| ·结果与分析 | 第81-82页 |
| ·注射Buffer、dsGFP和dsCYP6DZ7后,烟粉虱在不同时间内表达量的变化 | 第81-82页 |
| ·注射Buffer、dsGFP和dsCYP6DZ7后,药剂处理后死亡率的变化 | 第82页 |
| ·小结与讨论 | 第82-84页 |
| 第九章 CYP6DZ7基因在大肠杆菌中的原核表达 | 第84-93页 |
| ·材料与方法 | 第84-89页 |
| ·供试昆虫 | 第84-85页 |
| ·供试试剂 | 第85页 |
| ·表达引物的设计 | 第85-86页 |
| ·PET28a载体的获得 | 第86-88页 |
| ·IPTG诱导PET28a-CYP6DZ7重组质粒的表达 | 第88页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE检测 | 第88-89页 |
| ·结果与分析 | 第89-91页 |
| ·抗性品系烟粉虱CYP6DZ7基因表达全长的扩增 | 第89页 |
| ·原核表达载体重组子PET28a-CYP6DZ7的构建 | 第89-90页 |
| ·重组质粒的提取 | 第90-91页 |
| ·CYP6DZ7表达蛋白的SDS-PAGE检测 | 第91页 |
| ·小结与讨论 | 第91-93页 |
| 全文结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 作者简历 | 第111页 |
