| 摘要 | 第1-9页 |
| 文献综述 | 第9-18页 |
| 1 干扰素的研究进展 | 第9-14页 |
| ·干扰素的发现 | 第9页 |
| ·干扰素分类 | 第9页 |
| ·干扰素的结构 | 第9-10页 |
| ·干扰素的性质 | 第10页 |
| ·IFN-α和IFN-β介导的JAK-STAT信号通路 | 第10-11页 |
| ·干扰素的生物活性 | 第11-13页 |
| ·IFN-α研究进展 | 第13页 |
| ·干扰素的应用 | 第13-14页 |
| 2 重组蛋白表达及纯化 | 第14-17页 |
| ·表达系统选择 | 第14-15页 |
| ·表达载体的选择 | 第15页 |
| ·重组蛋白的纯化及复性 | 第15-17页 |
| 3 展望 | 第17-18页 |
| 前言 | 第18-19页 |
| 实验一 鸡α干扰素全长基因与编码成熟蛋白基因克隆与序列分析 | 第19-33页 |
| 1 实验材料 | 第19-21页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·载体与菌株 | 第19页 |
| ·主要试剂及配制 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-27页 |
| ·鸡脾脏组织总RNA的提取 | 第21页 |
| ·总RNA琼脂糖凝胶电泳检测 | 第21-22页 |
| ·鸡α干扰素全长基因(ChIFN-α)和去除信号肽的鸡成熟蛋白基因(ChIFN-α')的PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR产物 ChIFN-α和ChIFN-α'纯化回收 | 第23-24页 |
| ·PCR回收产物 ChIFN-α 和 ChIFN-α'与pMD19-T 的连接 | 第24页 |
| ·连接产物 pMD19-T-ChIFN-α 和 pMD19-T-ChIFN-α' 的转化 | 第24-25页 |
| ·pMD19-T-ChIFN-α 和 pMD19-T-ChIFN-α' 的菌液PCR鉴定 | 第25页 |
| ·重组质粒 pMD19-T-C72/FiV-a 和 pMD19-T-C7z/F7V-a'的提取 | 第25-26页 |
| ·重组质粒 pMD19-T-ChIFN-α 和 pMD19-T-ChIFN-α' 的双酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·pMD19-T-ChIFN-α 和 pMD19-T-ChIFN-α' 序列测定 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-32页 |
| ·鸡脾脏总RNA提取检测结果 | 第27页 |
| ·鸡α干扰素全长基因(ChIFN-α)和去信号肽的成熟蛋白基因(ChIFN-α')的PCR结果 | 第27-28页 |
| ·PCR产物纯化回收结果 | 第28-29页 |
| ·pMD19-T-ChIFN-α和pMD19-T-ChIFN-α'菌液PCR的鉴定 | 第29-30页 |
| ·pMD19-T-ChIFN-α和pMD19-T-ChIFN-α'重组质粒的双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·pMD19-T-ChIFN-α和pMD19-T-ChIFN-α'序列测定结果 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 实验二 鸡α干扰素成熟蛋白基因的原核表达、纯化及复性 | 第33-46页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| ·菌种、质粒和载体 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-38页 |
| ·重组质粒pMD19-T-ChIFN-α'和表达载体pET-32a的双酶切 | 第34-35页 |
| ·回收酶切片段 | 第35页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-ChIFN-α'的构建 | 第35页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-ChIFN-α'的转化及筛选 | 第35页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-ChIFN-α'的菌液PCR鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-ChIFN-α'的制备 | 第36页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-ChIFN-α'的鉴定 | 第36页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-ChIFN-α'转化表达感受态细胞BL21(DE3) | 第36-37页 |
| ·诱导表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE分析表达产物 | 第37页 |
| ·制备包涵体 | 第37-38页 |
| ·表达蛋白的Ni~(2+)-NTA亲和层析纯化 | 第38页 |
| ·表达蛋白的复性 | 第38页 |
| ·表达蛋白浓度的测定 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-43页 |
| ·连接产物pET-32a-ChIFN-α'菌液PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-ChIFN-α'的鉴定 | 第39-41页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第41-42页 |
| ·Ni~(2+)-NTA亲和层析纯化pET-32a-ChIFN-α'的表达蛋白 | 第42-43页 |
| ·表达蛋白浓度的测定结果 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 实验三 重组鸡α干扰素抗病毒效果研究 | 第46-51页 |
| 1 实验材料 | 第46-47页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·主要试剂和溶液配制 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46-47页 |
| 2 实验方法 | 第47-48页 |
| ·鸡胚成纤维(CEF)细胞单层的制备 | 第47页 |
| ·细胞病变抑制法研究重组鸡α干扰素的抗病毒效果 | 第47页 |
| ·鸡胚实验研究重组鸡α干扰素抗鸡肾型传染性支气管炎病毒效果 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-50页 |
| ·重组鸡α干扰素抗鸡痘病毒活性的测定结果 | 第48-49页 |
| ·重组鸡α干扰素抗鸡肾型传染性支气管炎病毒的效果 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| Abstract | 第55-57页 |
| 缩略词 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
