| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-22页 |
| ·副猪嗜血杆菌及其所致疾病概述 | 第11页 |
| ·副猪嗜血杆菌的生物学特性 | 第11-13页 |
| ·副猪嗜血杆菌的分离与培养 | 第11-12页 |
| ·药敏特性 | 第12-13页 |
| ·副猪嗜血杆菌的基因及基因组 | 第13-16页 |
| ·毒力因子 | 第13-15页 |
| ·HPS基因组简介 | 第15-16页 |
| ·副猪嗜血杆菌的预防 | 第16页 |
| ·噬菌体展示技术的概述 | 第16-20页 |
| ·M13噬菌体的生物学特性 | 第16-17页 |
| ·噬菌体抗体文库的构建 | 第17-18页 |
| ·抗体文库构建的方法 | 第18-19页 |
| ·抗体库的应用 | 第19-20页 |
| ·研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第2章 材料和方法 | 第22-37页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·选取的材料 | 第22页 |
| ·菌株及质粒 | 第22页 |
| ·主要仪器和设备 | 第22-23页 |
| ·酶及主要试剂 | 第23页 |
| ·主要溶液配制 | 第23-25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-37页 |
| ·总RNA的提取及cDNA的合成 | 第26-27页 |
| ·轻、重链基因的扩增 | 第27-29页 |
| ·PCR产物的回收 | 第29-30页 |
| ·回收轻、重链基因的PCR产物与pMD19-T载体连接 | 第30-32页 |
| ·重叠延伸PCR组装scFv | 第32-34页 |
| ·重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·scFv的表达 | 第35页 |
| ·重组噬菌体的制备 | 第35-36页 |
| ·重组噬菌体滴度的测定 | 第36页 |
| ·生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 第3章 结果与分析 | 第37-55页 |
| ·总RNA的制备 | 第37页 |
| ·扩增目的基因 | 第37-39页 |
| ·目的基因克隆到PMD 19-T载体 | 第39-42页 |
| ·菌液PCR鉴定H链基因和L链基因的克隆子 | 第39页 |
| ·质粒PCR鉴定H链基因和L链基因的克隆子 | 第39-40页 |
| ·测序鉴定H链基因和L链基因的克隆子 | 第40-42页 |
| ·scFv的组装 | 第42-53页 |
| ·重新扩增H链和L链的基因并加端 | 第42-43页 |
| ·重叠延伸PCR组装scFv | 第43-44页 |
| ·重组表达载体的制备 | 第44-53页 |
| ·scFv的表达 | 第53-54页 |
| ·重组噬菌体的滴度 | 第54-55页 |
| 第4章 讨论 | 第55-59页 |
| ·H链基因,L链基因及scFv基因的特点 | 第55-56页 |
| ·设计构建噬菌体抗体文库 | 第56-57页 |
| ·影响scFv表达的因素 | 第57-59页 |
| 第5章 结论与展望 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第59页 |
| ·下一步研究的方向 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录 核酸序列 | 第67-71页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第71页 |