| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-21页 |
| ·鱼类免疫系统的研究进展 | 第15-18页 |
| ·免疫组织和器官 | 第15-16页 |
| ·免疫细胞 | 第16-17页 |
| ·体液免疫因子 | 第17-18页 |
| ·鱼类非特异性细胞毒性细胞（NCC）的研究进展 | 第18-20页 |
| ·本文研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 2 兔抗红笛鲷 NCCRP-1 融合蛋白抗血清的制备及免疫组织化学分析 | 第21-34页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·实验对象 | 第21页 |
| ·实验菌株 | 第21页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第21页 |
| ·主要溶液及试剂的配制方法 | 第21-23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-28页 |
| ·NCCRP-1 融合蛋白的制备 | 第24-26页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第26页 |
| ·抗血清的制备 | 第26页 |
| ·血清效价的测定 | 第26-27页 |
| ·冰冻切片的制作 | 第27页 |
| ·免疫组化染色 | 第27-28页 |
| ·实验结果 | 第28-32页 |
| ·重组菌在优化条件下表达目的蛋白的纯化及 Western blot 分析 | 第28-29页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第29页 |
| ·兔抗血清效价 | 第29页 |
| ·免疫组化分析 | 第29-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 3 红笛鲷 NCC 活性的研究 | 第34-43页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34-36页 |
| ·实验对象 | 第34页 |
| ·实验靶细胞 | 第34页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第34-35页 |
| ·主要溶液及试剂的配制方法 | 第35-36页 |
| ·主要实验仪器 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-37页 |
| ·红笛鲷头肾 NCC 的分离 | 第36页 |
| ·靶细胞的培养 | 第36页 |
| ·流式细胞仪分析头肾 NCC 的数量 | 第36-37页 |
| ·NCC 杀伤活性分析 | 第37页 |
| ·兔抗红笛鲷 NCCRP-1 融合蛋白抗血清对 NCC 活性的抑制实验 | 第37页 |
| ·实验结果 | 第37-40页 |
| ·红笛鲷头肾 NCC 的分离 | 第37-38页 |
| ·流式细胞仪分析头肾 NCC 的数量 | 第38页 |
| ·NCC 杀伤活性分析 | 第38-40页 |
| ·兔抗红笛鲷 NCCRP-1 融合蛋白抗血清对 NCC 活性的抑制实验 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-43页 |
| 4 红笛鲷 NCCRP-1 基因真核表达载体的构建 | 第43-54页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43-46页 |
| ·实验对象 | 第43页 |
| ·实验所用基因 | 第43页 |
| ·质粒载体和受体菌株 | 第43-44页 |
| ·主要试剂、工具酶及试剂盒 | 第44-45页 |
| ·主要溶液和试剂的配制方法 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-51页 |
| ·红笛鲷总 RNA 的提取 | 第46页 |
| ·引物的设计 | 第46页 |
| ·红笛鲷 NCCRP-1 基因的 ORF 扩增 | 第46-47页 |
| ·PCR 产物切胶回收 | 第47页 |
| ·PCR 产物与 T 载体的连接 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态的制备 | 第48页 |
| ·转化 | 第48页 |
| ·阳性克隆筛选及测序 | 第48页 |
| ·重组克隆质粒 pMD18T-NCCRP 及 pGBKT7 质粒的提取 | 第48-49页 |
| ·重组克隆质粒 pMD18T-NCCRP 及 pGBKT7 质粒的双酶切 | 第49页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第49-50页 |
| ·连接 | 第50页 |
| ·转化 | 第50页 |
| ·重组质粒阳性克隆筛选及测序 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-53页 |
| ·NCCRP-1 基因的 ORF 扩增 | 第51页 |
| ·pMD18T-NCCRP 质粒双酶切 | 第51-52页 |
| ·菌落 PCR 筛选阳性克隆与重组质粒双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 5 NCCRP-1 基因在红笛鲷中表达差异的研究 | 第54-68页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-55页 |
| ·采样 | 第54页 |
| ·样品分析 | 第54-55页 |
| ·数据统计与分析 | 第55页 |
| ·实验结果 | 第55-67页 |
| ·LPS 刺激红笛鲷 24h 后 NCCRP-1 基因的组织表达差异 | 第55-56页 |
| ·LPS 刺激红笛鲷后各组织 NCCRP-1 基因的时间表达差异 | 第56-60页 |
| ·苯酚处理红笛鲷后各组织 NCCRP-1 基因的时间表达差异 | 第60-63页 |
| ·CuSO4处理红笛鲷后各组织 NCCRP-1 基因的时间表达差异 | 第63-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| 6 结论 | 第68-69页 |
| ·兔抗红笛鲷 NCCRP-1 融合蛋白抗血清的制备及免疫组织化学分析 | 第68页 |
| ·红笛鲷 NCC 活性的研究 | 第68页 |
| ·红笛鲷 NCCRP-1 基因真核表达载体的构建 | 第68页 |
| ·NCCRP-1 基因在红笛鲷中表达差异的研究 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简历 | 第77-78页 |
| 导师简介 | 第78页 |
