| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 主要缩略词 | 第12-16页 |
| 1 绪论 | 第16-30页 |
| ·问题的提出及研究意义 | 第16-19页 |
| ·国内外研究现状 | 第19-25页 |
| ·基因表达系列分析的研究与应用 | 第19-22页 |
| ·转录后修饰-选择性剪接 | 第22-24页 |
| ·应力刺激调控的选择性剪接研究现状 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的和研究内容 | 第25-30页 |
| ·本研究的目的 | 第25页 |
| ·本研究的主要内容 | 第25-28页 |
| ·本文的创新点 | 第28-30页 |
| 2 成骨细胞的原代培养、纯化及鉴定 | 第30-36页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·材料与方法 | 第30-33页 |
| ·主要材料、试剂与仪器 | 第30-31页 |
| ·成骨细胞的原代培养 | 第31-32页 |
| ·成骨细胞的传代培养 | 第32页 |
| ·成骨细胞的纯化 | 第32页 |
| ·成骨细胞的鉴定 | 第32-33页 |
| ·实验结果 | 第33-35页 |
| ·原代成骨细胞形态学观察 | 第33页 |
| ·纯化后传代成骨细胞形态学观察 | 第33-34页 |
| ·成骨细胞鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 3 过载拉伸装置的设计和制作 | 第36-40页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·材料与方法 | 第36-38页 |
| ·主要材料与仪器 | 第36-37页 |
| ·拉伸装置的设计和制作 | 第37页 |
| ·基底膜细胞接种 | 第37-38页 |
| ·加载参数的选择 | 第38页 |
| ·加载前后成骨细胞的形态学观察 | 第38页 |
| ·实验结果 | 第38-39页 |
| ·本章小结 | 第39-40页 |
| 4 过载拉伸对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响 | 第40-56页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·材料与方法 | 第40-46页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第40-41页 |
| ·成骨细胞的接种与加载 | 第41页 |
| ·细胞周期检测 | 第41-42页 |
| ·细胞的碱性磷酸酶检测 | 第42页 |
| ·细胞的胞外无机钙检测 | 第42-43页 |
| ·BCA 法测定蛋白质浓度 | 第43页 |
| ·细胞总 RNA 提取 | 第43-44页 |
| ·半定量 RT-PCR 检测细胞内基因表达 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR 分析所用引物设计与合成 | 第45-46页 |
| ·实验结果 | 第46-51页 |
| ·过载拉伸对成骨细胞增殖的影响 | 第46-47页 |
| ·过载拉伸对成骨细胞分化的影响 | 第47-48页 |
| ·过载拉伸对成骨细胞矿化的影响 | 第48-49页 |
| ·过载拉伸对成骨细胞特异性基因表达的影响 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| ·应力刺激与成骨细胞增殖 | 第51-52页 |
| ·应力刺激与成骨细胞分化和矿化 | 第52页 |
| ·应力刺激与成骨细胞特异性基因表达调控 | 第52-54页 |
| ·本章小结 | 第54-56页 |
| 5 过载拉伸条件下成骨细胞 LongSAGE 文库的构建和验证 | 第56-78页 |
| ·前言 | 第56页 |
| ·材料与方法 | 第56-62页 |
| ·主要材料与试剂 | 第56-57页 |
| ·主要仪器与设备 | 第57-58页 |
| ·细胞培养及拉伸加载 | 第58页 |
| ·LongSAGE 文库构建 | 第58-60页 |
| ·Real-time PCR 验证 | 第60-62页 |
| ·实验结果 | 第62-70页 |
| ·总 RNA 提取 | 第62-63页 |
| ·分离回收 130bp 双标签 | 第63页 |
| ·分离回收 40bp 双标签 | 第63-64页 |
| ·40bp 双标签体的连接 | 第64-66页 |
| ·LongSAGE 文库概述 | 第66-67页 |
| ·LongSAGE 文库提供的差异表达基因 | 第67-69页 |
| ·Real-time PCR 验证 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-75页 |
| ·LongSAGE 与其他高通量分析方法的比较 | 第70-71页 |
| ·LongSAGE 文库 | 第71-72页 |
| ·LongSAGE 实验结果的验证 | 第72-73页 |
| ·差异表达基因分析 | 第73-75页 |
| ·本章小结 | 第75-78页 |
| 6 过载拉伸调控的差异表达基因的分析 | 第78-110页 |
| ·前言 | 第78-79页 |
| ·材料与方法 | 第79-83页 |
| ·DAVID 软件分析方法 | 第79-80页 |
| ·GoSurfer 软件分析方法 | 第80-83页 |
| ·KEGG 通路分析方法 | 第83页 |
| ·实验结果 | 第83-105页 |
| ·差异表达基因的功能分类 | 第83-88页 |
| ·差异表达基因的 GO 分类 | 第88-91页 |
| ·显著上调和显著下调的差异表达基因 GO 层次树分析 | 第91-99页 |
| ·差异表达基因的 KEGG 通路分析 | 第99-102页 |
| ·系统的成骨细胞中应力信号转导网络构建 | 第102-105页 |
| ·讨论 | 第105-108页 |
| ·本章小结 | 第108-110页 |
| 7 过载拉伸对剪接因子的调控 | 第110-122页 |
| ·前言 | 第110页 |
| ·材料与方法 | 第110-114页 |
| ·主要材料与试剂 | 第110-111页 |
| ·主要仪器与设备 | 第111-112页 |
| ·细胞培养及拉伸加载 | 第112页 |
| ·总 RNA 提取 | 第112页 |
| ·荧光实时定量 PCR | 第112-114页 |
| ·实验结果 | 第114-117页 |
| ·过载拉伸对 MGF 表达的调控 | 第114页 |
| ·过载拉伸对剪接因子 ASF/SF2 表达的调控 | 第114-115页 |
| ·过载拉伸对剪接因子 SC35 表达的调控 | 第115-116页 |
| ·过载拉伸对剪接因子 hnRNP A1 表达的调控 | 第116-117页 |
| ·讨论 | 第117-120页 |
| ·本章小结 | 第120-122页 |
| 8 过载拉伸对剪接相关的激酶的调控 | 第122-134页 |
| ·前言 | 第122页 |
| ·材料与方法 | 第122-126页 |
| ·主要材料与试剂 | 第122-123页 |
| ·主要仪器与设备 | 第123-124页 |
| ·细胞培养及拉伸加载 | 第124页 |
| ·总 RNA 提取 | 第124页 |
| ·荧光实时定量 PCR 检测过载拉伸前后剪接相关激酶的表达 | 第124-126页 |
| ·实验结果 | 第126-130页 |
| ·过载拉伸对 SRPK1 表达的影响 | 第126-127页 |
| ·过载拉伸对 SRPK2 表达的影响 | 第127页 |
| ·过载拉伸对 CLK1 表达的影响 | 第127-128页 |
| ·过载拉伸对 PI3K 表达的影响 | 第128-129页 |
| ·过载拉伸对 PP1 表达的影响 | 第129-130页 |
| ·讨论 | 第130-133页 |
| ·本章小结 | 第133-134页 |
| 9 主要结论与未来工作展望 | 第134-138页 |
| ·主要结论 | 第134-136页 |
| ·未来工作展望 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138-140页 |
| 参考文献 | 第140-158页 |
| 附录 | 第158页 |
| A 作者在攻读博士学位期间科研及发表论文情况 | 第158页 |
| B 参加的科研项目情况 | 第158页 |
