| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-23页 |
| ·鱼腥藻 PCC7120 概述 | 第12-15页 |
| ·蓝藻简介 | 第12页 |
| ·鱼腥藻分类及特点 | 第12页 |
| ·鱼腥藻 PCC7120 研究背景 | 第12-15页 |
| ·蓝藻水华 | 第15-18页 |
| ·蓝藻水华发生机制 | 第15页 |
| ·蓝藻水华危害 | 第15-16页 |
| ·蓝藻水华治理 | 第16-18页 |
| ·细菌毒素-抗毒素系统 | 第18-21页 |
| ·毒素-抗毒素系统研究现状 | 第18页 |
| ·细菌 TA 系统种类 | 第18-20页 |
| ·细菌染色体上 TA 系统 | 第20页 |
| ·mazEF 系统 | 第20-21页 |
| ·relBE 系统 | 第21页 |
| ·鱼腥藻 PCC7120 染色体上“毒素-抗毒素系统” | 第21-22页 |
| ·实验内容及研究意义 | 第22-23页 |
| ·实验方案及内容 | 第22页 |
| ·研究意义 | 第22-23页 |
| 第2章 鱼腥藻 all3211/asl3212 基因的克隆及功能鉴定 | 第23-39页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·实验藻种、菌株及质粒 | 第23页 |
| ·PCR 引物 | 第23-24页 |
| ·培养基及培养条件 | 第24-25页 |
| ·药品及试剂 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-30页 |
| ·分子生物学操作 | 第26-27页 |
| ·鱼腥藻 PCC7120 基因组 DNA 提取 | 第27-28页 |
| ·all3211、asl3212 基因扩增 | 第28-29页 |
| ·双启动子表达载体的构建 | 第29页 |
| ·含毒素基因 all3211 和抗毒素基因 asl3212 的重组质粒的构建 | 第29页 |
| ·基因 all3211 和 asl3212 在大肠杆菌中诱导表达 | 第29-30页 |
| ·结果 | 第30-37页 |
| ·all3211 和 asl3212 序列分析 | 第30页 |
| ·MazF 系统进化树 | 第30-32页 |
| ·双启动子表达载体构建及酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒 pMJ411 和 pMJ412 的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·诱导 all3211 和 asl3212 基因表达蛋白检测 | 第34页 |
| ·毒素基因 all3211 诱导表达产物对大肠杆菌细胞毒性作用 | 第34-35页 |
| ·asl3212 表达产物对 all3211 表达产物的毒性抑制作用 | 第35页 |
| ·asl3212/ all3211 表达产物对 E.coli BL21 生长影响的定量分析 | 第35-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第3章 鱼腥藻 PCC7120 基因 asl4561/asl4562 的克隆及表达 | 第39-51页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第39页 |
| ·PCR 引物 | 第39页 |
| ·培养条件 | 第39页 |
| ·实验试剂 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-42页 |
| ·实验操作 | 第40页 |
| ·asl4561、asl4562 及 relBE 基因 PCR 扩增 | 第40页 |
| ·TA 克隆 | 第40-41页 |
| ·重组表达质粒构建 | 第41页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第41页 |
| ·relBE 基因表达蛋白的条件优化 | 第41-42页 |
| ·实验结果 | 第42-49页 |
| ·asl4561 和 asl4562 基因序列分析 | 第42-44页 |
| ·asl4561 基因的克隆及重组表达载体 pET28a-asl4561 构建 | 第44页 |
| ·asl4562 基因的克隆及重组表达载体 pET28a-asl4562 构建 | 第44-45页 |
| ·relBE 基因的克隆及重组表达载体 pET28a-relBE 构建 | 第45-46页 |
| ·asl4561、asl4562 及 relBE 表达产物对 BL21 影响 | 第46页 |
| ·目的蛋白诱导表达检测 | 第46-47页 |
| ·relBE 基因表达蛋白的条件优化 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第4章 all3211/asl3212 和 asl4561/asl4562 基因缺失突变株的构建 | 第51-57页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料和方法 | 第51-53页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第51-52页 |
| ·PCR 引物 | 第52页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第52-53页 |
| ·鱼腥藻 PCC7120 的转化及筛选 | 第53页 |
| ·结果 | 第53-56页 |
| ·all3211-asl3212 基因缺失突变重组质粒构建 | 第53-54页 |
| ·asl4561-asl4562 基因缺失突变重组质粒构建 | 第54-55页 |
| ·all3211-asl3212 基因缺失突变株构建 | 第55-56页 |
| ·asl4561-asl4562 基因缺失突变株构建 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第5章 all3211/asl3212和 asl4561/asl4562 基因对鱼腥藻 PCC7120的毒性及抗毒性作用 | 第57-65页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第57-58页 |
| ·PCR 引物 | 第58页 |
| ·培养条件 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-59页 |
| ·实验操作 | 第58页 |
| ·铜离子诱导表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·铜离子诱导表达毒素-抗毒素基因表达的重组质粒构建 | 第59页 |
| ·鱼腥藻 PCC7120 的转化及筛选 | 第59页 |
| ·转化菌诱导方法及生长分析 | 第59页 |
| ·实验结果 | 第59-63页 |
| ·铜离子诱导表达载体构建及酶切鉴定 | 第60页 |
| ·铜离子诱导 all3211 和 all3211/asl3212 表达的重组质构建 | 第60页 |
| ·铜离子诱导 asl4561 及 asl4561/asl4562 表达的重组质粒构建 | 第60-61页 |
| ·铜离子诱导表达结果分析 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 主要结论及展望 | 第65-67页 |
| 1 结论 | 第65页 |
| 2 研究展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录 A 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第73页 |
