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过表达Ac转座酶对玉米内源性转座子的影响和玉米GRAS转录因子家族cDNA克隆及初步的功能分析

中文摘要第1-11页
Abstract第11-13页
1 引言第13-28页
   ·玉米背景介绍第13页
   ·Ac-Ds 转座子第13-16页
     ·玉米转座子的发现第13-14页
     ·转座子的类型第14页
     ·三种转座因子的特点第14页
     ·Ac/Ds 转座子系统第14-15页
     ·Ac/Ds 二元转座系统第15页
     ·玉米内源 Ac/Ds 转座系统第15-16页
   ·玉米转基因技术第16-22页
     ·农杆菌转化技术第16-18页
       ·Ti 质粒的分类第16页
       ·Ti 质粒的结构和功能第16-17页
       ·Ti 重组质粒的构建第17页
       ·Ti 质粒转化过程第17-18页
       ·Ti 质粒介导的转化技术第18页
     ·基因枪法第18-22页
       ·基因枪法的发展第19页
       ·基因枪的优缺点第19-20页
       ·基因枪转化的参数第20-21页
       ·片段 DNA 基因枪转化第21页
       ·基因枪共转化第21-22页
   ·GRAS 转录因子研究进展第22-26页
     ·转录因子第22-23页
     ·GRAS 转录因子家族的命名第23页
     ·GRAS 转录因子家族的分类第23页
     ·GRAS 转录因子家族的蛋白结构特点第23-24页
     ·GRAS 转录因子家族的功能第24-25页
     ·GRAS 转录因子家族研究现状第25-26页
   ·本研究的目的和意义第26-28页
     ·过表达 Ac 转座酶对玉米内源性转座子的影响第26-27页
     ·玉米 GRAS 转录因子家族 cDNA 克隆及初步的功能分析第27-28页
2 材料和方法第28-43页
   ·实验材料第28-30页
     ·植物材料和种植第28页
     ·菌株和质粒第28页
     ·酶及生化试剂第28页
     ·PCR 引物第28-30页
     ·培养基第30页
   ·试验方法第30-43页
     ·取材及 RNA 提取与反转录第30-32页
       ·Trizol 法提取 RNA第30-31页
       ·反转录 cDNA 的合成第31-32页
     ·质粒 DNA 的提取和片段 DNA 的制备第32-33页
       ·小量碱法提质粒第32页
       ·百泰克试剂盒小量质粒提取第32-33页
       ·基因枪用片段制备第33页
     ·大肠杆菌和农杆菌感受态制备及转化第33-34页
       ·大肠杆菌感受态制备第33页
       ·热激法转化大肠杆菌感受态第33-34页
       ·农杆菌感受态制备第34页
       ·冻融法转化农杆菌感受态第34页
     ·载体构建第34-36页
       ·PCR 扩增目的片段第34-35页
       ·连接反应第35页
       ·酶切与回收第35-36页
       ·表达载体构建第36页
     ·农杆菌侵染法介导的玉米遗传转化第36-38页
       ·农杆菌的培养和处理第36-37页
       ·幼胚的处理第37页
       ·侵染与共培养第37页
       ·筛选阶段第37页
       ·转基因植株再生第37-38页
       ·转基因植株的鉴定第38页
     ·基因枪法玉米遗传转化第38-41页
       ·基因枪设备第38页
       ·基因枪质粒的制备(百泰克小量试剂盒)第38页
       ·基因枪 DNA 片段制备第38-39页
       ·基因枪微弹制作第39-40页
       ·基因枪转化第40-41页
       ·转化愈伤组织的筛选和植株再生第41页
       ·转基因植株的鉴定第41页
     ·农杆菌介导的短柄草转化第41-43页
       ·愈伤组织诱导第41-42页
       ·农杆菌侵染愈伤组织第42页
       ·转基因植株鉴定第42-43页
3 结果和分析第43-63页
   ·过表达 Ac 转座酶对玉米内源性转座子的影响第43-55页
     ·载体构建及片段 DNA 制备第43-44页
     ·玉米取胚及愈伤组织诱导第44-45页
     ·农杆菌介导的玉米转化第45-50页
       ·农杆菌瞬时表达实验第45-47页
       ·农杆菌侵染转化幼胚第47-50页
     ·基因枪法玉米转化第50-55页
       ·基因枪瞬时表达实验第50-52页
       ·鱼精蛋白与片段基因枪转化的探索第52-55页
   ·玉米 GRAS 转录因子家族 cDNA 克隆及初步的功能分析第55-63页
     ·玉米 GRAS 转录因子家族保守序列分析第55-57页
     ·玉米 GRAS 转录因子家族基因染色体位置第57页
     ·玉米 GRAS 亚家族分类第57-59页
     ·玉米 GRAS 基因成员表达部位的分析第59-60页
     ·玉米 GRAS 基因成员的克隆及植物表达载体构建第60-61页
     ·农杆菌介导的短柄草转化第61-62页
     ·转基因植株的鉴定及表型分析第62-63页
4 讨论第63-67页
   ·过表达 Ac 转座酶对玉米内源性转座子的影响第63-65页
     ·农杆菌介导的玉米转基因技术的研究第63页
     ·基因枪法转化技术的研究第63-64页
     ·瞬时表达实验 GFP 荧光标记第64-65页
   ·玉米 GRAS 转录因子家族 cDNA 克隆及初步的功能分析第65-67页
     ·玉米 GRAS 转录因子家族保守序列的分析第65页
     ·玉米 GRAS 转录因子家族成员染色体分布及分类第65页
     ·玉米 GRAS 家族成员的克隆第65-66页
     ·短柄草转化及表型第66-67页
5 结论第67-68页
   ·过表达 Ac 转座酶对玉米内源性转座子的影响第67页
   ·玉米 GRAS 转录因子家族 cDNA 克隆及初步的功能分析第67-68页
参考文献第68-75页
致谢第75页

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