| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| ·木聚糖和木聚糖酶 | 第13-15页 |
| ·甘露聚糖和甘露聚糖酶 | 第15-17页 |
| ·双功酶 | 第17-18页 |
| ·双功酶的构建方法 | 第18-21页 |
| ·重叠延伸法 | 第18页 |
| ·酶连法 | 第18-19页 |
| ·表达蛋白连接法 | 第19-20页 |
| ·连接肽 | 第20-21页 |
| ·本文立题依据和主要工作 | 第21-22页 |
| ·研究依据、目的及意义 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 木聚糖酶基因序列的优化、拼接及重组毕赤酵母基因工程菌的构建 | 第22-31页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料与方法 | 第22-25页 |
| ·试剂及仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·实验结果与讨论 | 第25-30页 |
| ·木聚糖酶氨基酸序列分析 | 第25-26页 |
| ·木聚糖酶基因序列优化 | 第26-27页 |
| ·木聚糖酶基因序列合成与拼接 | 第27-29页 |
| ·重组表达载体的构建与表达 | 第29-30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 重组木聚糖酶酶学性质的研究 | 第31-44页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·实验材料与方法 | 第31-34页 |
| ·试剂及仪器 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-34页 |
| ·实验结果与讨论 | 第34-43页 |
| ·重组Xyn10和Xyn1 1的蛋白纯化 | 第34-35页 |
| ·pH对重组Xyn10和Xyn11酶活性的影响 | 第35-36页 |
| ·温度对重组Xyn10和Xyn11酶活性的影响 | 第36-37页 |
| ·金属离子和化学试剂对重组Xyn10和Xyn11酶活性的影响 | 第37-38页 |
| ·重组Xyn10和Xyn11底物特异性和动力学参数的测定 | 第38-39页 |
| ·重组Xyn10和Xyn11酶解产物的TLC分析 | 第39-40页 |
| ·重组Xyn11高表达菌株和遗传稳定性菌株的筛选 | 第40-41页 |
| ·重组Xyn10和Xyn11菌株的摇瓶培养 | 第41-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 重组Xyn11菌株培养条件的优化 | 第44-54页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·实验材料与方法 | 第44-45页 |
| ·试剂及仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·实验结果与讨论 | 第45-53页 |
| ·最佳氮源的确定 | 第45-46页 |
| ·最佳碳源的确定 | 第46-47页 |
| ·无机盐的确定 | 第47页 |
| ·Plackett-Burman实验结果 | 第47-49页 |
| ·最陡爬坡实验结果 | 第49页 |
| ·中心组合实验结果 | 第49-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第五章 重组融合酶Xyn-Man/Man-Xyn的构建 | 第54-61页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料与方法 | 第54-56页 |
| ·试剂及仪器 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·实验结果与讨论 | 第56-60页 |
| ·融合基因xyn-man/man-xyn的构建 | 第56-59页 |
| ·融合基因表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·融合基因的表达 | 第60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第六章 融合酶Xyn-Man/Man-Xyn酶学性质的研究 | 第61-80页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·实验材料与方法 | 第61-64页 |
| ·试剂及仪器 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-64页 |
| ·实验结果与讨论 | 第64-79页 |
| ·融合双功酶的蛋白纯化和去糖基化分析 | 第64-65页 |
| ·温度对融合双功酶酶活性的影响 | 第65-68页 |
| ·pH对融合双功酶酶活性的影响 | 第68-72页 |
| ·融合双功酶动力学参数的测定 | 第72-73页 |
| ·融合双功酶的表达水平和比酶活 | 第73-74页 |
| ·融合双功酶酶解产物的MS和HPLC分析 | 第74-77页 |
| ·融合双功酶的协同效应分析 | 第77-79页 |
| ·本章小结 | 第79-80页 |
| 第七章 结论与展望 | 第80-82页 |
| ·本研究的主要结论 | 第80页 |
| ·本研究的主要创新点 | 第80-81页 |
| ·有待进一步研究的问题 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第95页 |
