| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·概述 | 第11-12页 |
| ·国内外研究进展 | 第12-18页 |
| ·胞内微环境对微生物细胞生长和产物积累的重要作用 | 第12-14页 |
| ·胞内ATP 供给水平的调控策略 | 第14-16页 |
| ·基于ATP 水平调控的发酵过程优化 | 第16-18页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第18-21页 |
| ·调控胞内ATP 供给优化发酵过程中仍存在的问题 | 第18-20页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 光滑球拟酵母基因操作系统的构建 | 第21-31页 |
| ·前言 | 第21-22页 |
| ·材料与方法 | 第22-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·培养基及相关溶液 | 第22-23页 |
| ·试剂、酶、引物、Marker 及相关试剂盒 | 第23页 |
| ·分子生物学操作 | 第23-26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-30页 |
| ·G418 抗性试验 | 第26页 |
| ·敲除框的构建 | 第26-27页 |
| ·缺陷型突变株的富集与筛选 | 第27-28页 |
| ·营养缺陷型突变株的验证 | 第28-29页 |
| ·增强型绿色荧光蛋白的可诱导表达 | 第29-30页 |
| ·质粒稳定性 | 第30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 线粒体基因敲除过程中的单细胞线粒体基因组多态性 | 第31-47页 |
| ·前言 | 第31-33页 |
| ·材料与方法 | 第33-36页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·培养基和相关溶液 | 第33页 |
| ·分子生物学操作 | 第33-34页 |
| ·分析方法 | 第34-36页 |
| ·结果 | 第36-43页 |
| ·线粒体转化 | 第36-37页 |
| ·mtDNA 转化子在YPG 平板上生长 | 第37-38页 |
| ·mtDNA 转化子选择性丢失mtDNA(Δatp6::ARG8~m) | 第38页 |
| ·mtDNA 异质性的存在 | 第38-40页 |
| ·寡霉素和厌氧培养降低mtDNA(Δatp6::ARG8~m)的丢失率 | 第40-41页 |
| ·厌氧培养对线粒体和mtDNA 拷贝数的影响 | 第41-42页 |
| ·厌氧培养降低ATP6/ARG8~m 比例 | 第42页 |
| ·mtDNA(ATP6)的消除 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-46页 |
| ·真核细胞中的SCMGP 现象 | 第43-44页 |
| ·以T. glabrata mtDNA 转化子作为模型研究SCMGP 现象 | 第44-45页 |
| ·mtDNA 不稳定性在SCMGP 现象中的作用 | 第45页 |
| ·mtDNA 的选择性丢失 | 第45页 |
| ·厌氧状态下的线粒体融合/分裂过程促进mtDNA 同质体的筛选 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 膜间腔中质子的过量积累导致ATP6 缺失菌株MTDNA 不稳定 | 第47-61页 |
| ·前言 | 第47-48页 |
| ·材料与方法 | 第48-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·培养基及培养条件 | 第48-49页 |
| ·NADH 氧化酶和交替氧化酶的表达 | 第49-50页 |
| ·分析方法 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-56页 |
| ·NADH 氧化途径对ATP6 敲除菌株中mtDNA 稳定性的影响 | 第51-52页 |
| ·T. glabrata 及其突变株的胞内ATP 浓度 | 第52页 |
| ·T. glabrata 及其突变株的胞内ROS 浓度 | 第52-53页 |
| ·MIMS 中H+的过量积累 | 第53-54页 |
| ·ATP6 缺失菌株中ΔΨm 的不均一性 | 第54-56页 |
| ·乌头酸酶的转录与定位分析 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-60页 |
| ·nDNA 编码的基因未受影响 | 第56-57页 |
| ·ARG8~m 置换ATP6 的过程中并未引起GC 簇和重复序列的变化 | 第57页 |
| ·胞内ATP 浓度不是导致mtDNA 不稳定性的主导因素 | 第57页 |
| ·ROS 生成量增加是导致ATP6 缺失菌株中mtDNA 不稳定性的重要因素 | 第57-58页 |
| ·MIMS 中的低pH 影响线粒体基质蛋白的定位 | 第58-59页 |
| ·MIMS 中的低pH 增加ROS 的生成 | 第59页 |
| ·NADH 氧化途径对中膜间腔中质子积累过程的影响 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 ATP 合成酶亚基缺失对光滑球拟酵母中心代谢途径的影响 | 第61-73页 |
| ·前言 | 第61-62页 |
| ·材料与方法 | 第62-63页 |
| ·菌株 | 第62页 |
| ·培养基 | 第62页 |
| ·培养方法 | 第62-63页 |
| ·分析方法 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-69页 |
| ·ATP 合成酶基因敲除及noxE 的表达对发酵特性的影响 | 第63-64页 |
| ·代谢网络分析 | 第64-65页 |
| ·ATP 合成酶基因敲除及noxE 的表达对胞内ATP 水平的影响 | 第65-66页 |
| ·ATP 合成酶基因敲除及noxE 的表达对低pH 和渗透压耐受性的影响 | 第66-67页 |
| ·中心代谢关键酶基因的转录分析 | 第67-68页 |
| ·中心代谢途径关键酶活性分析 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-72页 |
| ·ATP 水平、胞内微环境与细胞生长和碳中心代谢的关系 | 第69-70页 |
| ·ATP 合成酶亚基缺失后的NAD~+再生方式对中心代谢途径的影响 | 第70页 |
| ·EMP 和TCA 中关键酶基因表达及活性水平对中心代谢途径的影响 | 第70-71页 |
| ·线粒体区隔对于中心代谢途径的保护作用 | 第71-72页 |
| ·本章小结 | 第72-73页 |
| 第六章 依赖ATP 的PH 平衡过程在细胞抵御酸胁迫中的作用 | 第73-83页 |
| ·前言 | 第73-74页 |
| ·材料与方法 | 第74-75页 |
| ·菌株 | 第74页 |
| ·培养基和培养方法 | 第74页 |
| ·分析方法 | 第74-75页 |
| ·结果 | 第75-79页 |
| ·柠檬酸促进低pH 值条件下T. glabrata 的生长 | 第75-76页 |
| ·胞外pH 值对胞内ATP 浓度的影响 | 第76页 |
| ·柠檬酸添加促进能量代谢 | 第76-78页 |
| ·提高ATP 浓度促进pH 梯度的维持过程 | 第78-79页 |
| ·pH 值对糖酵解关键酶活性的影响 | 第79页 |
| ·pH 梯度与胞内ATP 浓度的关系 | 第79页 |
| ·讨论 | 第79-82页 |
| ·细胞抵御酸胁迫的主要机制 | 第80-81页 |
| ·柠檬酸在增强ATP 合成中的作用 | 第81页 |
| ·pH 平衡过程在丙酮酸积累过程中的作用 | 第81-82页 |
| ·提高耐受酸胁迫能力的重要意义 | 第82页 |
| ·本章小结 | 第82-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 论文创新点 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-107页 |
| 附录I：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第107-108页 |
| 附录II：定量PCR 相关引物 | 第108页 |
