| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-20页 |
| 1 纤维素的结构和功能 | 第13页 |
| 2 植物纤维素合酶基因研究综述 | 第13-18页 |
| ·纤维素合酶基因的发现 | 第13页 |
| ·植物纤维素合酶的结构 | 第13-14页 |
| ·纤维素合酶相似蛋白 | 第14-15页 |
| ·植物纤维素合酶CesA的表达规律 | 第15-17页 |
| ·植物纤维素合酶与纤维素合成的关系 | 第17页 |
| ·纤维素的生物合成需要多个纤维素合酶基因共同参与 | 第17-18页 |
| ·韧皮纤维植物纤维素合酶基因的研究进展 | 第18页 |
| 3 本研究的目的、意义和主要内容 | 第18-20页 |
| 第二章 苎麻纤维素合酶基因家族部分基因的克隆 | 第20-38页 |
| 1 材料与试剂 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-30页 |
| ·苎麻组织总RNA的提取与cDNA第一链合成 | 第20-23页 |
| ·苎麻组织总RNA的提取 | 第20-21页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第21-23页 |
| ·RLM-RACE原理及RACE引物设计 | 第23-25页 |
| ·RLM-RACE的原理 | 第23-25页 |
| ·5’RACE引物设计 | 第25页 |
| ·3’RACE引物设计 | 第25页 |
| ·PCR扩增及目的片段回收 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·目的片段回收 | 第26页 |
| ·PCR产物的T载体克隆 | 第26-27页 |
| ·转化大肠杆菌Trans1-T1 | 第27页 |
| ·目的基因的扩增、连接、转化 | 第27-29页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·苎麻cDNA第一链的合成 | 第28页 |
| ·PCR扩增,连接,转化 | 第28-29页 |
| ·质粒的提取与阳性克隆的鉴定 | 第29页 |
| ·序列的生物学分析 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-37页 |
| ·苎麻总RNA的提取结果 | 第30页 |
| ·BnCesA1 5’端与BnCesA3的5’端和3’端的克隆 | 第30-31页 |
| ·BnCesA1 5’RACE与BnCesA3的5’RACE和3’RACE的PCR扩增结果 | 第30-31页 |
| ·测序结果的分析 | 第31页 |
| ·目的基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增结果 | 第31页 |
| ·测序结果的分析 | 第31-32页 |
| ·BnCeSA1、BnCesA3和BnCesA6基因的生物学分析 | 第32-37页 |
| ·BnCesA1基因的生物学分析 | 第32-34页 |
| ·BnCesA3基因的生物学分析 | 第34-36页 |
| ·BnCesA6基因的生物学分析 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 苎麻纤维素合酶基因的表达分析 | 第38-42页 |
| 1 材料与试剂 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-40页 |
| ·苎麻各组织总RNA的提取及反转录 | 第38页 |
| ·表达引物的设计 | 第38-39页 |
| ·cDNA浓度的调整 | 第39页 |
| ·不同苎麻品种及组织中三个CesA基因的扩增 | 第39页 |
| ·PCR产物电泳和分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-41页 |
| ·不同组织RNA提取结果 | 第40页 |
| ·苎麻CesA基因在不同品种及组织中的表达结果 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 过表达载体的构建 | 第42-47页 |
| 1 材料与试剂 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-44页 |
| ·含目的基因的质粒与表达载体的双酶切及回收纯化 | 第42-43页 |
| ·cDNA片段与表达载体的连接 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第44页 |
| ·菌落PCR筛选含重组质粒的菌落 | 第44页 |
| ·酶切鉴定重组子与测序 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-45页 |
| ·目的基因片段的分离与纯化 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的菌落PCR检测 | 第45页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 RNAI载体的构建 | 第47-56页 |
| 1 材料与试剂 | 第47-48页 |
| ·质粒、菌种与试剂 | 第47页 |
| ·引物设计 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-53页 |
| ·PCR扩增RNAi各片段 | 第48-49页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第49页 |
| ·pRl101-AN载体与GUS片段的重组 | 第49-50页 |
| ·载体与片段的双酶切及纯化回收 | 第49页 |
| ·连接反应及大肠杆菌的转化 | 第49页 |
| ·重组质粒的提取与检测 | 第49-50页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第50页 |
| ·RNAi顺式片段的重组 | 第50-51页 |
| ·pGUS和顺式片段的双酶切及纯化回收 | 第50-51页 |
| ·pGUS和RNAi顺式片段的连接 | 第51页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第51页 |
| ·重组质粒的提取与检测 | 第51页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第51页 |
| ·RNAi反式片段的重组 | 第51-53页 |
| ·pGCBNC与RNAi反式片段的双酶切及纯化回收 | 第51-52页 |
| ·pGCBNC与RNAi反式片段的连接 | 第52页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第52页 |
| ·重组质粒的提取与检测 | 第52页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-55页 |
| ·PCR扩增RNAi各片段 | 第53页 |
| ·重组子pGUS的构建 | 第53-54页 |
| ·菌落PCR检测重组子 | 第53-54页 |
| ·酶切鉴定重组子 | 第54页 |
| ·重组子pGCBNC的构建 | 第54-55页 |
| ·菌落PCR筛选重组子 | 第54页 |
| ·重组子pGCBNC的酶切鉴定 | 第54-55页 |
| ·RNAi载体的构建 | 第55页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第55页 |
| ·重组子的测序结果 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 第六章 转基因载体导入农杆菌 | 第56-59页 |
| 1 材料与试剂 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-57页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第56页 |
| ·农杆菌的转化 | 第56-57页 |
| ·菌落PCR筛选阳性转化菌落 | 第57页 |
| ·农杆菌的质粒提取 | 第57页 |
| ·质粒PCR鉴定提取的质粒 | 第57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-58页 |
| ·菌落PCR筛选阳性转化菌落 | 第57-58页 |
| ·PCR鉴定提取的质粒 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 第七章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 1 论文小结 | 第59-60页 |
| 2 后续的设想 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简历 | 第68页 |
