| 中文摘要 | 第1-18页 |
| 英文摘要 | 第18-28页 |
| 符号说明 | 第28-30页 |
| 前言 | 第30-38页 |
| (一)HBV感染相关的动物模型 | 第30-31页 |
| (二)HBV感染与TRAIL诱导的肝细胞凋亡 | 第31-35页 |
| (三)TRAIL诱导的凋亡与肝炎的治疗 | 第35-36页 |
| (四)HBV转基因小鼠肝癌模型与生物信息学 | 第36-38页 |
| 总体技术路线 | 第38-40页 |
| 第一部分 利用小鼠模型探讨HBV致肝细胞凋亡的机制及治疗对策 | 第40-88页 |
| 第一节 HBV转基因小鼠过继转输HBV特异性CTL建立急性肝炎模型 | 第41-50页 |
| 材料与方法 | 第41-46页 |
| 1.材料 | 第41-43页 |
| 2.方法 | 第43-46页 |
| ·HBV转基因小鼠的质量鉴定 | 第43-44页 |
| ·质粒pcDNA3-HBV免疫小鼠获得HBV特异性CTL | 第44-46页 |
| ·HBV转基因小鼠急性肝炎模型的制备和鉴定 | 第46页 |
| 结果 | 第46-48页 |
| 1.HBV转基因小鼠的质量鉴定 | 第46页 |
| 2.质粒免疫小鼠获得HBV特异性CTL | 第46-47页 |
| 3.HBV转基因小鼠急性肝炎模型的制备和鉴定 | 第47-48页 |
| 讨论 | 第48-50页 |
| 第二节 尾静脉高压注射法建立急性乙型肝炎小鼠模型 | 第50-58页 |
| 材料与方法 | 第50-55页 |
| 1.材料 | 第50-51页 |
| 2.方法 | 第51-55页 |
| ·质粒pcDNA3、pcDNA-1.1HBV大量提取和纯化 | 第51-52页 |
| ·尾静脉水压注射法建立小鼠急性肝炎模型 | 第52页 |
| ·血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)测定 | 第52-53页 |
| ·ELISA检测HBsAg、HBeAg及抗-HBs | 第53-54页 |
| ·实时定量PCR检测HBV DNA含量 | 第54页 |
| ·肝组织病理切片HE染色及免疫组化染色 | 第54-55页 |
| 结果 | 第55-56页 |
| 1.血清转氨酶的动态变化 | 第55-56页 |
| 2.血清HBsAg、HBeAg及抗-HBs的动态变化 | 第56页 |
| 3.实时定量PCR检测HBV DNA含量 | 第56页 |
| 4.肝组织HE染色及免疫组化染色 | 第56页 |
| 讨论 | 第56-58页 |
| 第三节 TRAIL凋亡通路分子Bax在HBV致小鼠模型肝细胞凋亡中的作用 | 第58-75页 |
| 材料和方法 | 第58-69页 |
| 1.材料 | 第58-61页 |
| 2.方法 | 第61-69页 |
| ·TRAIL的可溶性受体sDR5蛋白的制备、纯化和定量 | 第61-62页 |
| ·sDR5对HBV转基因小鼠急性肝炎模型的作用研究 | 第62页 |
| ·血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)测定 | 第62-63页 |
| ·SDS-PAGE与Western blot | 第63-66页 |
| ·半定量RT-PCR检测TRAIL受体的表达 | 第66-68页 |
| ·流式细胞术检测肝细胞凋亡 | 第68页 |
| ·肝组织病理切片HE染色 | 第68页 |
| ·针对Bax基因小干扰RNA序列的设计及载体构建 | 第68页 |
| ·Bax小干扰RNA载体封闭Bax表达的体内验证和作用 | 第68-69页 |
| ·TUNEL原位检测模型小鼠肝细胞凋亡 | 第69页 |
| 结果 | 第69-71页 |
| 1.HBV感染增加TRAIL诱导的肝细胞凋亡 | 第69页 |
| 2.HBV感染导致Bax表达上调及其下游Caspase的变化 | 第69-70页 |
| 3.Bax小干扰RNA载体的DNA测序结果及序列分析 | 第70页 |
| 4.Bax小干扰RNA载体封闭Bax表达的体内验证 | 第70页 |
| 5.Bax基因沉默改善HBV导致的肝脏炎症损伤 | 第70页 |
| 6.Bax基因沉默对Caspase活化的影响 | 第70-71页 |
| 讨论 | 第71-75页 |
| 第四节 利用sDR5蛋白封闭TRAIL凋亡通路减轻小鼠肝脏炎症 | 第75-86页 |
| 材料和方法 | 第75-81页 |
| 1.材料 | 第75-77页 |
| 2.方法 | 第77-81页 |
| ·重组人sDR5蛋白的纯化 | 第77-78页 |
| ·Folin—酚比色法测定纯化后sDR5蛋白的浓度 | 第78页 |
| ·sDR5活性的体外验证 | 第78页 |
| ·尾静脉水压注射法建立急性肝炎小鼠模型及其鉴定 | 第78页 |
| ·sDR5对TRAIL诱导凋亡的逆转作用 | 第78-79页 |
| ·sDR5与美能的疗效比较 | 第79页 |
| ·血清转氨酶活性检测 | 第79-80页 |
| ·TUNEL检测肝细胞凋亡 | 第80-81页 |
| 结果 | 第81-82页 |
| 1.获得纯化的重组人sDR5蛋白 | 第81页 |
| 2.测定纯化后sDR5蛋白的浓度 | 第81页 |
| 3.sDR5提前24小时注射可显著降低转氨酶水平 | 第81页 |
| 4.sDR5最佳剂量的确定 | 第81页 |
| 5.sDR5通过阻断TRAIL诱导的肝细胞凋亡减轻小鼠肝脏病理损伤 | 第81-82页 |
| 6.sDR5与SNMC的疗效无显著差异 | 第82页 |
| 讨论 | 第82-86页 |
| 小结 | 第86-88页 |
| 第二部分 HBV转基因小鼠肝癌形成模型的动态生物信息学研究 | 第88-108页 |
| 第一节 HBV转基因小鼠肝癌形成模型的鉴定 | 第89-92页 |
| 材料和方法 | 第89-90页 |
| 1.材料 | 第89页 |
| 2.方法 | 第89-90页 |
| ·模型的鉴定 | 第89页 |
| ·HBV复制与血清抗原表达水平测定 | 第89-90页 |
| 结果 | 第90-91页 |
| 1.HBV转基因小鼠6、12、20个月的肝脏病理动态变化 | 第90-91页 |
| 2.HBV转基因小鼠HBV复制和表达水平 | 第91页 |
| 讨论 | 第91-92页 |
| 第二节 利用基因芯片进行基因表达谱差异研究 | 第92-102页 |
| 材料和方法 | 第92-96页 |
| 1.材料 | 第92-93页 |
| 2.方法 | 第93-96页 |
| ·组织RNA提取 | 第93-94页 |
| ·RNA纯化与质检 | 第94页 |
| ·对样品RNA进行荧光标记 | 第94页 |
| ·杂交与清洗 | 第94-95页 |
| ·芯片扫描、图像采集与数据分析 | 第95页 |
| ·生物信息学分析 | 第95页 |
| ·差异基因的RT-PCR验证 | 第95-96页 |
| 结果 | 第96-98页 |
| 1.RNA定量与质控 | 第96页 |
| 2.基因芯片生物信息学分析结果 | 第96-97页 |
| 3.补体成分在肝癌发生过程中变化 | 第97页 |
| 4.差异基因的RT-PCR验证 | 第97-98页 |
| 5.表达下调基因相关miRNA | 第98页 |
| 讨论 | 第98-102页 |
| 第三节 肝癌形成动态过程的蛋白质组学研究 | 第102-107页 |
| 材料与方法 | 第102-104页 |
| 1.材料 | 第102-103页 |
| 2.方法 | 第103-104页 |
| ·蛋白质样品制备与定量 | 第103页 |
| ·双向凝胶电泳 | 第103页 |
| ·凝胶图像扫描与分析 | 第103-104页 |
| ·SWISS-2DPAGE数据库查询 | 第104页 |
| ·质谱分析 | 第104页 |
| ·Mascot数据库检索 | 第104页 |
| 结果 | 第104-106页 |
| ·-DE结果分析 | 第104-105页 |
| 2.质谱分析 | 第105页 |
| 3.Mascot数据库检索 | 第105-106页 |
| 讨论 | 第106-107页 |
| 小结 | 第107-108页 |
| 附图 | 第108-120页 |
| 参考文献 | 第120-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 发表论文专著及获得的荣誉 | 第131-134页 |
| 1. Journal Articles | 第134-150页 |
| 1) Hepatitis B virus sensitizes hepatocytes to TRAIL-induced apoptosis through Bax. J Immunol. 2007, 178(1): 503-510. | 第136-144页 |
| 2) Blockade of TRAIL pathway ameliorates HBV-induced hepatocyte apoptosis in an acute hepatitis model. Biochem Biophys Res Comm. 2007, 352(2): 329-334. | 第144-150页 |
| 2. Conference Abstracts | 第150-156页 |
| 1) Discovery of key complement components and relevant miRNA in HBV transgenic mouse model of HCC development. Mol Immunol. 2007; 44(1-3): 209. (XXIth International Complement Workshop) | 第152-154页 |
| 2) Microarray analyses and molecular profiling during hepatocellular carcinogenesis in HBV transgenic mice. Cell Biol Int. 2006; 30: S43. (Sixth International Symposium on Frontiers in Life Sciences) | 第154-155页 |
| 3) TRAIL-induced apoptosis pathway can be blocked by sDR5 in mouse models of human viral hepatitis B. (The 3rd FIMSA. W2-3.24 No. 276) | 第155-156页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第156页 |
