| 中文摘要 | 第1-17页 |
| ABSTRACT | 第17-22页 |
| 符号说明 | 第22-25页 |
| 第一章 绪论 | 第25-52页 |
| ·瑞氏木霉 | 第25-27页 |
| ·丝状真菌功能基因组学研究概况及策略 | 第27-36页 |
| ·比较基因组学 | 第29-30页 |
| ·丝状真菌的转化技术 | 第30-31页 |
| ·连续基因敲除方法 | 第31-32页 |
| ·转座子标签技术 | 第32页 |
| ·REMI技术 | 第32-33页 |
| ·RNAi技术 | 第33-34页 |
| ·丝状真菌蛋白质组学研究 | 第34页 |
| ·丝状真菌功能基因组学研究的其它相关技术 | 第34-36页 |
| ·农杆菌介导转化(AMT)丝状真菌研究进展 | 第36-41页 |
| ·AMT技术的分子基础 | 第36-37页 |
| ·AMT技术应用于正向和反向遗传学研究 | 第37页 |
| ·T-DNA插入位点侧翼序列的克隆及分离 | 第37-39页 |
| ·农杆菌介导的T-DNA随机插入突变 | 第39-40页 |
| ·农杆菌介导的基因定向突变 | 第40页 |
| ·AMT技术应用于功能基因组学的优点 | 第40-41页 |
| ·T-DNA插入突变的问题 | 第41页 |
| ·丝状真菌突变子筛选的研究 | 第41-44页 |
| ·代谢突变子的筛选 | 第41-42页 |
| ·菌丝顶端生长缺陷突变子的筛选 | 第42页 |
| ·有丝分裂突变子的筛选 | 第42页 |
| ·发育突变子的筛选 | 第42-43页 |
| ·减数分裂突变子的筛选 | 第43-44页 |
| ·其他突变子的筛选 | 第44页 |
| ·纤维素酶研究进展 | 第44-47页 |
| ·纤维素酶系组分 | 第45页 |
| ·纤维素酶的结构 | 第45-46页 |
| ·纤维素酶降解机制 | 第46页 |
| ·纤维素酶基因的诱导和调控 | 第46-47页 |
| ·纤维素酶高产菌种选育 | 第47页 |
| ·类胡萝卜素氧化裂解酶研究进展 | 第47-52页 |
| 第二章 农杆菌介导的瑞氏木霉转化及T-DNA插入突变分析 | 第52-70页 |
| ·引言 | 第52-53页 |
| ·实验材料和方法 | 第53-61页 |
| ·菌株和质粒 | 第53页 |
| ·培养基和培养条件 | 第53-54页 |
| ·菌种保藏技术 | 第54页 |
| ·主要分子实验试剂 | 第54页 |
| ·重组DNA技术 | 第54-55页 |
| ·引物设计及PCR扩增条件 | 第55-56页 |
| ·pBI-hph载体的构建 | 第56页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第56-57页 |
| ·瑞氏木霉原生质体的制备 | 第57-58页 |
| ·农杆菌介导转化丝状真菌瑞氏木霉 | 第58-59页 |
| ·瑞氏木霉染色体提取 | 第59-61页 |
| ·实验结果和讨论 | 第61-69页 |
| ·pBI-hph载体的构建结果 | 第61-62页 |
| ·双元载体pBI-hph转化农杆菌AGL1 | 第62页 |
| ·农杆菌介导的瑞氏木霉转化 | 第62-64页 |
| ·瑞氏木霉AMT转化子的分子验证 | 第64-65页 |
| ·TAIL-PCR克隆T-DNA插入位点侧翼序列 | 第65-66页 |
| ·T-DNA插入位点序列特征分析 | 第66-68页 |
| ·瑞氏木霉T-DNA插入突变体库的建立 | 第68-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 第三章 瑞氏木霉生长发育异常突变子的筛选和分析 | 第70-93页 |
| ·引言 | 第70-71页 |
| ·材料利方法 | 第71-76页 |
| ·菌株和质粒 | 第71-72页 |
| ·培养基和培养条件 | 第72页 |
| ·主要分子生化实验试剂 | 第72页 |
| ·DNA操作方法 | 第72页 |
| ·ccd突变子筛选及生长发育特征分析 | 第72-73页 |
| ·TrCCD1基因的克隆、特征及分析 | 第73-74页 |
| ·菌丝形态观察 | 第74页 |
| ·类胡萝卜素含量测定 | 第74页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC)测定β胡萝卜素含量 | 第74-75页 |
| ·丝状真菌自主复制质粒pME-tcl的构建及互补实验 | 第75-76页 |
| ·实验结果与讨论 | 第76-91页 |
| ·ccd突变子的分离和TrCCD1基因的鉴定 | 第76-79页 |
| ·T-DNA插入TrCCD1基因何点分析 | 第79-80页 |
| ·突变子ccdO和ccdP的表型特征 | 第80-82页 |
| ·突变子ccdO和ccdP的生孢特征 | 第82-83页 |
| ·类胡萝卜素分泌量测定 | 第83-84页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)测定β胡萝卜素含量 | 第84-87页 |
| ·互补实验 | 第87-88页 |
| ·其它形态突变子筛选及分析 | 第88-91页 |
| ·形态突变子的初步筛选 | 第88-89页 |
| ·形态突变子的菌落特征 | 第89页 |
| ·形态突变子的菌丝异常现象 | 第89-90页 |
| ·形态突变子的T-DNA插入位点侧翼序列的克隆 | 第90-91页 |
| ·小结 | 第91-93页 |
| 第四章 纤维素降解突变菌株的筛选和分析 | 第93-102页 |
| ·引言 | 第93-94页 |
| ·材料和方法 | 第94-96页 |
| ·菌株 | 第94页 |
| ·培养基和培养方法 | 第94页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第94-95页 |
| ·DNS法测定还原糖(葡萄糖)的标准曲线制作 | 第95页 |
| ·滤纸酶活力(FPA)测定 | 第95页 |
| ·CMC-Na酶活力测定 | 第95-96页 |
| ·基因克隆及同源性比较 | 第96页 |
| ·实验结果与讨论 | 第96-100页 |
| ·纤维素降解突变菌株的初步筛选 | 第96-97页 |
| ·突变菌株的滤纸酶活力分析 | 第97-98页 |
| ·突变菌株的CMCase活力分析 | 第98-99页 |
| ·纤维素降解突变菌株的突变基因克隆及分析 | 第99-100页 |
| ·小结 | 第100-102页 |
| 第五章 绿色荧光蛋白标记的双元载体构建及农杆菌转化 | 第102-114页 |
| ·引言 | 第102-103页 |
| ·实验材料和方法 | 第103-106页 |
| ·菌株和质粒 | 第103-104页 |
| ·培养基和培养条件 | 第104页 |
| ·主要分子实验试剂 | 第104页 |
| ·重组DNA技术 | 第104页 |
| ·引物设计及PCR扩增条件 | 第104-105页 |
| ·pBI-gh载体的构建 | 第105页 |
| ·pCB-hg载体的构建 | 第105-106页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第106页 |
| ·农杆菌介导转化丝状真菌瑞氏木霉 | 第106页 |
| ·瑞氏木霉染色体振荡破壁法快速小量提取 | 第106页 |
| ·结果与讨论 | 第106-113页 |
| ·pBI-gfp载体的构建结果 | 第106-108页 |
| ·双元载体pBI-gh的构建结果 | 第108-109页 |
| ·双元载体pBI-gh转化农杆菌AGL1 | 第109-110页 |
| ·含pBI-gh双元载体的农杆菌AGL1介导的瑞氏木霉转化 | 第110页 |
| ·双元载体pCB-hg的构建结果 | 第110-112页 |
| ·双元载体pCB-hg转化农杆菌AGL1 | 第112页 |
| ·含pCB-hg双元载体的农杆菌AGL1介导的瑞氏木霉转化 | 第112-113页 |
| ·小结 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 攻读学位期间已(待)发表的学术论文目录 | 第130-131页 |
| 在校期间所获奖励 | 第131-132页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第132-133页 |
| 外文论文 | 第133-167页 |
| Ⅰ. Agrobacterium-mediated transformation (AMT) of Trichoderma reesei as an efficient tool for random insertional mutagenesis | 第133-149页 |
| Ⅱ. The Trichoderma reesei CCD1 gene encoding a carotenoid cleavage dioxygenase is required for hyphal growth and conidiospore development | 第149-167页 |
