| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 图表目录 | 第10-11页 |
| 本论文主要英文缩写 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-20页 |
| 引言 | 第20-22页 |
| 1 材料与方法 | 第22-42页 |
| ·主要培养基 | 第22页 |
| ·LB培养基 | 第22页 |
| ·含氨苄青霉素的LB琼脂培养基 | 第22页 |
| ·脑心浸液培养基(BHI) | 第22页 |
| ·定居因子琼脂培养基(CFA) | 第22页 |
| ·工程菌及质粒 | 第22页 |
| ·酶类及主要试剂 | 第22-23页 |
| ·实验动物与免疫血清 | 第23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23-24页 |
| ·主要溶液配制 | 第24-28页 |
| ·抗生素母液 | 第24页 |
| ·PBS缓冲液 | 第24页 |
| ·X-gal贮存液 | 第24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第24-25页 |
| ·感受态细胞制备用溶液 | 第25页 |
| ·SDS-PAGE电泳所需溶液 | 第25-26页 |
| ·诱导表达及蛋白提纯所用溶液 | 第26-27页 |
| ·Western-blot实验所用溶液 | 第27-28页 |
| ·ELISA实验所用溶液 | 第28页 |
| ·病原菌的分离与鉴定 | 第28-29页 |
| ·霍乱弧菌Y1菌株菌毛的提取 | 第29-30页 |
| ·鼠抗霍乱弧菌菌毛免疫血清的制备 | 第30页 |
| ·免疫原的制备 | 第30页 |
| ·免疫接种 | 第30页 |
| ·鼠抗菌毛抗体的检测 | 第30页 |
| ·霍乱弧菌毒素共调菌毛tcpA基因的克隆与序列分析 | 第30-35页 |
| ·细菌培养与基因组DNA提取 | 第30-31页 |
| ·引物设计与合成 | 第31页 |
| ·tcpA基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第32页 |
| ·PCR产物的单酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·PCR纯化产物与pMD-18T载体的连接 | 第33页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·连接产物的转化 | 第33页 |
| ·重组克隆质粒的提取 | 第33-34页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·tcpA基因的序列测定与分析 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1-tcpA的构建与鉴定 | 第35-37页 |
| ·引物设计与合成 | 第35页 |
| ·tcpA基因的PCR扩增与纯化 | 第35页 |
| ·PCR纯化产物与表达质粒的双酶切 | 第35页 |
| ·双酶切产物的回收与纯化 | 第35-36页 |
| ·tcpA基因与表达质粒的连接 | 第36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36页 |
| ·重组表达质粒的提取 | 第36-37页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1-tcpA的原核表达 | 第37-39页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第37页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第37-38页 |
| ·表达产物的Western-blot分析 | 第38页 |
| ·表达产物的定位与可溶性分析 | 第38-39页 |
| ·最佳诱导时间的优化 | 第39页 |
| ·重组蛋白免疫血清的细胞黏附抑制试验 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白GST-TcpA的提取 | 第39页 |
| ·重组蛋白免疫血清的制备 | 第39-40页 |
| ·细菌培养 | 第40页 |
| ·细胞培养 | 第40页 |
| ·细胞黏附抑制试验 | 第40页 |
| ·重组融合蛋白的免疫保护试验 | 第40-42页 |
| ·实验小鼠的免疫 | 第40-41页 |
| ·免疫小鼠的人工感染试验 | 第41-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-53页 |
| ·病原菌的鉴定 | 第42-43页 |
| ·霍乱弧菌菌毛抗血清的制备 | 第43页 |
| ·tcpA基因的扩增与PCR产物的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| ·tcpA基因的序列分析 | 第45-47页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1-tcpA的构建与鉴定 | 第47页 |
| ·tcpA基因的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·表达产物的Western-blot分析 | 第48-49页 |
| ·表达产物的定位与可溶性分析 | 第49页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白免疫血清的细胞黏附抑制作用 | 第50-52页 |
| ·重组蛋白诱导的体内免疫保护作用 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-56页 |
| ·研制黏附素疫苗是控制细菌性疾病的主要措施之一 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白GST-TcpA的抗原性 | 第54页 |
| ·重组蛋白GST-TcpA的免疫保护作用 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |
