| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一部分 mTOR通过p63-Jagged-1上调Notch通路实现对分化的调控 | 第8-58页 |
| 1 前言 | 第8-11页 |
| 2 技术路线 | 第11-13页 |
| 3 材料与方法 | 第13-27页 |
| ·实验材料 | 第13-19页 |
| ·细胞系和菌株 | 第13页 |
| ·引物和RNAi序列 | 第13-14页 |
| ·主要实验仪器 | 第14-15页 |
| ·细胞培养材料 | 第15页 |
| ·抗体 | 第15页 |
| ·酶及抑制剂 | 第15-16页 |
| ·药品、试剂及溶液配制 | 第16-19页 |
| ·主要实验方法 | 第19-27页 |
| ·细胞培养、复苏与冻存 | 第19-20页 |
| ·细胞中总RNA的提取 | 第20页 |
| ·RT-PCR二步法 | 第20-21页 |
| ·Realtime PCR | 第21页 |
| ·siRNA靶序列的选择 | 第21-22页 |
| ·真核细胞转染—DNA和siRNA | 第22-24页 |
| ·诱导分化 | 第24页 |
| ·Western Blot分析 | 第24-27页 |
| 4 结果 | 第27-46页 |
| ·检测mTOR对细胞分化的作用 | 第27-29页 |
| ·成肌分化 | 第27-29页 |
| ·成脂分化 | 第29页 |
| ·mTOR高度活化对分化影响的机制 | 第29-46页 |
| ·mTOR高度活化激活Notch通路 | 第30-31页 |
| ·mTOR高度活化上调Notch配体Jagged-1的表达 | 第31页 |
| ·mTOR高度活化激活p63 | 第31-32页 |
| ·p63调控Notch配体Jagged-1的表达 | 第32页 |
| ·P63-Jagged1-Notch通路的激活依赖于mTOR | 第32页 |
| ·下调p63促进mTOR活化细胞分化 | 第32-33页 |
| ·mTOR激活p63-Jagged1-Notch通路的机制 | 第33-46页 |
| 5 讨论 | 第46-49页 |
| 参考文献 | 第49-58页 |
| 第二部分 PDGF受体通过IRS-1调控胰岛素信号通路 | 第58-79页 |
| 1 前言 | 第58-60页 |
| 2 技术路线 | 第60-61页 |
| 3 材料与方法 | 第61-63页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·细胞系、菌株和载体 | 第61页 |
| ·引物 | 第61页 |
| ·抗体 | 第61-62页 |
| ·主要实验方法 | 第62-63页 |
| 4 结果 | 第63-71页 |
| ·PDGF受体对胰岛素受体底物的表达起重要的调节作用 | 第63页 |
| ·PDGF受体缺失导致细胞呈现出胰岛素抵抗 | 第63页 |
| ·IRS恢复PDGF受体缺失细胞的胰岛素反应 | 第63-64页 |
| ·PDGF受体上调TSC缺失细胞中IRS的表达 | 第64页 |
| ·PDGF受体恢复TSC缺失细胞的胰岛素反应 | 第64-65页 |
| ·PDGF受体对IRS调控的机制 | 第65-71页 |
| ·mRNA水平 | 第65页 |
| ·蛋白降解水平 | 第65-71页 |
| 5 讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 第三部分 间充质干细胞的成脂分化不依赖胰岛素及mTOR的上调 | 第79-98页 |
| 1 前言 | 第79-81页 |
| 2 技术路线 | 第81-82页 |
| 3 材料与方法 | 第82-85页 |
| ·实验材料 | 第82-83页 |
| ·细胞系 | 第82页 |
| ·细胞培养材料 | 第82页 |
| ·抗体 | 第82-83页 |
| ·主要实验方法 | 第83-85页 |
| ·成人脂肪间充质干细胞的分离培养 | 第83页 |
| ·成人脂肪间充质干细胞的接种和扩增培养 | 第83页 |
| ·流式细胞仪鉴定细胞的表型 | 第83-84页 |
| ·流式细胞术分析细胞周期分布 | 第84页 |
| ·成脂诱导 | 第84页 |
| ·Western Blot分析 | 第84-85页 |
| 4 结果 | 第85-92页 |
| ·间充质干细胞成脂分化过程不需要胰岛素 | 第85-86页 |
| ·体外培养脂肪来源MSCs的生物学性状 | 第85页 |
| ·MSCs的成脂分化不需要胰岛素的参与 | 第85页 |
| ·MSCs成脂分化过程中mTOR信号呈下调状态 | 第85-86页 |
| ·MSCs的成脂分化过程需要mTOR信号通路的活性 | 第86页 |
| ·MSCs的成脂分化过程中PDGFR的表达上调 | 第86-92页 |
| 5 讨论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-98页 |
| 结论 | 第98-101页 |
| 综述 mTOR信号通路在细胞分化和肿瘤发生中的作用 | 第101-117页 |
| 1 mTOR信号通路 | 第101-104页 |
| ·上游分子 | 第101-103页 |
| ·PI3K | 第101-102页 |
| ·Akt | 第102页 |
| ·PTEN | 第102页 |
| ·TSC1/2 | 第102-103页 |
| ·mTOR | 第103页 |
| ·下游分子 | 第103-104页 |
| ·S6K和4EBP | 第103-104页 |
| 2 PI3K-Akt-mTOR信号通路在细胞分化中的作用 | 第104-106页 |
| ·PI3K-Akt-mTOR信号通路在胚胎干细胞分化中的作用 | 第104页 |
| ·PI3K-Akt-mTOR信号通路在成体干细胞分化中的作用 | 第104-106页 |
| ·PI3K-Akt-mTOR信号通路与脂肪细胞分化 | 第104-105页 |
| ·PI3K-Akt-mTOR信号通路与成骨分化 | 第105页 |
| ·PI3K-Akt-mTOR信号通路与平滑肌的分化 | 第105页 |
| ·PI3K-Akt-mTOR信号通路与内皮分化 | 第105-106页 |
| ·PI3K-Akt-mTOR信号通路与上皮细胞的分化 | 第106页 |
| 3 PI3K-Akt-mTOR信号传递通路在肿瘤形成中的作用 | 第106-108页 |
| 4 结语 | 第108页 |
| 参考文献 | 第108-117页 |
| 缩略语表 | 第117-119页 |
| 附录 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
