丁香假单胞菌HrpA单克隆抗体的制备及scFv抗体库的构建
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-10页 |
| 2 文献综述 | 第10-20页 |
| ·植物病原细菌hrp基因 | 第10-16页 |
| ·抗体工程 | 第16-20页 |
| 3 材料和方法 | 第20-33页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·动物及菌株 | 第20页 |
| ·试剂与材料 | 第20-21页 |
| ·仪器 | 第21-22页 |
| ·PCR引物 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-33页 |
| ·HrpA抗原蛋白的制备 | 第22-23页 |
| ·抗原蛋白免疫小鼠 | 第23页 |
| ·免疫小鼠尾部取血测定血清效价 | 第23页 |
| ·细胞融合 | 第23-25页 |
| ·HAT选择杂交瘤及抗体检测 | 第25页 |
| ·有限稀释法单克隆化杂交瘤 | 第25-26页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第26页 |
| ·单克隆抗体的型及亚类鉴定 | 第26-27页 |
| ·单克隆抗体亲和常数的测定 | 第27页 |
| ·杂交瘤细胞RNA提取 | 第27-28页 |
| ·Scfv片段的构建 | 第28-30页 |
| ·pcANTAB 5E-scFv噬菌体库的构建 | 第30-33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-39页 |
| ·抗原蛋白HrpA的制备 | 第33页 |
| ·免疫小鼠血清效价的鉴定 | 第33-34页 |
| ·细胞融合 | 第34-35页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选和克隆化 | 第35页 |
| ·HrpA单克隆抗体类型及亚类的鉴定 | 第35页 |
| ·HrpA单克隆抗体亲和力常数的测定 | 第35页 |
| ·pCANTAB 5E-scFv重组质粒的构建 | 第35-39页 |
| 5 小结与讨论 | 第39-43页 |
| ·HrpA的制备 | 第39-40页 |
| ·细胞的融合 | 第40页 |
| ·杂交瘤细胞RNA的提取 | 第40-41页 |
| ·scFv的组装和扩增 | 第41页 |
| ·噬菌体抗体库的构建 | 第41-42页 |
| ·后续研究 | 第42页 |
| ·应用前景 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-51页 |
| 附录 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
