图表清单 | 第1-8页 |
缩略词表 | 第8-10页 |
摘要 | 第10-11页 |
Abstract | 第11-12页 |
引言 | 第12-13页 |
1 文献综述 | 第13-20页 |
·磷脂酰肌醇的分子结构及与之相互作用的蛋白结构域 | 第13-14页 |
·PX结构域和SNXs蛋白家族 | 第14-15页 |
·内涵体细胞器和蛋白分拣 | 第15-16页 |
·SNX10及其在细胞水平的功能 | 第16页 |
·个体水平的基因敲低和过表达技术 | 第16-17页 |
·个体水平的原位杂交技术 | 第17-18页 |
·模式生物斑马鱼 | 第18页 |
·左右不对称发育 | 第18-19页 |
·心脏的发育 | 第19页 |
·拟解决的问题 | 第19-20页 |
2 材料与方法 | 第20-39页 |
·材料 | 第20-26页 |
·动物材料 | 第20页 |
·菌种 | 第20页 |
·细胞系 | 第20页 |
·酶及试剂盒、载体等 | 第20-22页 |
1) 酶 | 第20页 |
2) Marker及核酸染料 | 第20-21页 |
3) 试剂盒及引物 | 第21页 |
4) 克隆载体 | 第21-22页 |
·细胞培养基及转染试剂 | 第22页 |
·原位杂交相关试剂 | 第22-23页 |
·morpholino寡核苷酸 | 第23页 |
·主要溶液 | 第23-25页 |
1) 免疫荧光 | 第23-24页 |
2) 原位杂交 | 第24-25页 |
·主要仪器 | 第25-26页 |
·常用相关软件及网站 | 第26页 |
·方法 | 第26-39页 |
·动物材料的处理 | 第26页 |
·总RNA提取、反转录和检测 | 第26-28页 |
1) RNA提取 | 第26-27页 |
2) 反转录 | 第27-28页 |
3) cDNA质量检测 | 第28页 |
·目的基因的RT-PCR | 第28-31页 |
1) RT-PCR | 第29页 |
2) 目的片段回收、连接、转化 | 第29-30页 |
3) 克隆的鉴定和测序 | 第30-31页 |
·细胞转染及免疫荧光 | 第31-33页 |
1) MCF7细胞系的培养 | 第31页 |
2) MCF7细胞系的转染 | 第31页 |
3) 免疫荧光 | 第31-33页 |
·斑马鱼养殖 | 第33页 |
·显微注射及morpholino基因敲低技术 | 第33-34页 |
·原位杂交 | 第34-39页 |
3 结果与分析 | 第39-49页 |
·总RNA提取 | 第39页 |
·各基因cDNA全长的克隆 | 第39-41页 |
·dSNX10a的序列与NCBI公布的SNX10序列差别 | 第41页 |
·转染细胞鉴定dSNX10a/dSNX10b/xSNX10 | 第41-42页 |
·免疫荧光鉴定dSNX10a/dSNX10b细胞器定位结果 | 第42-43页 |
·斑马鱼dSNX10a/dSNX10b原位杂交结果和dSNX10a/dSNX10b基因表达敲低后个体表型 | 第43-46页 |
·小结和讨论 | 第46-49页 |
·小结 | 第46-47页 |
·讨论 | 第47-49页 |
参考文献 | 第49-53页 |
致谢 | 第53页 |