| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-44页 |
| ·古菌 | 第12-20页 |
| ·三域学说 | 第12页 |
| ·古菌域的界和古菌多样性 | 第12-14页 |
| ·古菌的细胞结构 | 第14-15页 |
| ·古菌的基因组 | 第15-17页 |
| ·古菌的转录 | 第17-19页 |
| ·古菌的翻译 | 第19-20页 |
| ·极端嗜热古菌和硫化叶菌 | 第20-24页 |
| ·嗜热特性 | 第20-22页 |
| ·硫化叶菌 | 第22-24页 |
| ·古菌DNA复制概述 | 第24-42页 |
| ·复制原点 | 第24-26页 |
| ·起始阶段 | 第26-33页 |
| ·延伸阶段 | 第33-41页 |
| ·古菌染色质 | 第41-42页 |
| ·研究目的和意义 | 第42-44页 |
| 2 材料与方法 | 第44-56页 |
| ·实验材料 | 第44-50页 |
| ·菌株和质粒 | 第44-45页 |
| ·PCR引物 | 第45-47页 |
| ·电泳迁移率改变实验(EMSA)用的DNA寡核苷酸链 | 第47页 |
| ·培养基、抗生素及培养温度 | 第47-48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·抽提液和缓冲液 | 第48-50页 |
| ·实验仪器 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-56页 |
| ·核酸操作方法 | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌感受态制备及常规转化 | 第51-52页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE | 第52页 |
| ·Ssocdc6、Ssocdc6△C和Ssomcm基因的克隆、表达和纯化 | 第52-53页 |
| ·DNA底物的同位素标记 | 第53页 |
| ·电泳迁移率改变实验(EMSA) | 第53-54页 |
| ·Pull-down实验 | 第54页 |
| ·抗体的制备和Western blot实验 | 第54页 |
| ·细菌双杂交实验 | 第54-55页 |
| ·体外自磷酸化实验 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-96页 |
| ·SsoCdc6-2、SsoCdc6-2△C和SsoMCM的基因克隆、原核表达和纯化 | 第56-61页 |
| ·SsoCdc6-2、SsoCdc6-2△C和SsoMCM原核表达载体的构建 | 第56-59页 |
| ·SsoCdc6-2、SsoCdc6-2△C和SsoMCM的表达和纯化 | 第59-61页 |
| ·小结 | 第61页 |
| ·EMSA实验中DNA底物的设计 | 第61页 |
| ·EMSA实验结果 | 第61-81页 |
| ·SsoCdc6-1和SsoCdc6-2与DNA底物D1的结合 | 第61-67页 |
| ·SsoCdc6-2和SsoCdc6-3与DNA底物D2的结合 | 第67-70页 |
| ·SsoCdc6-1和SsoCdc6-3与DNA底物D3的结合 | 第70-75页 |
| ·SsoCdc6三个起始蛋白相互调控各自对DNA底物D3的结合 | 第75-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| ·三个SsoCdc6复制起始蛋白两两之间的物理相互作用 | 第81-86页 |
| ·无标签(untagged)SsoCdc6蛋白的表达和纯化 | 第81-83页 |
| ·三个SsoCdc6蛋白两两之间的物理相互作用 | 第83页 |
| ·小结 | 第83-86页 |
| ·起始蛋白SsoCdc6与解旋酶SsoMCM之间的相互作用 | 第86-89页 |
| ·双杂交重组质粒pBTCdc6-2、pBTMCM和pTRGMCM的构建 | 第86-88页 |
| ·SsoCdc6与SsoMCM之间的相互作用 | 第88页 |
| ·小结 | 第88-89页 |
| ·SsoCdc6-2突变体SsoCdc6-2KA基本生化性质的研究 | 第89-96页 |
| ·SsoCdc6-2KA原核表达载体pET15bCdc6-2KA的构建 | 第89-91页 |
| ·SsoCdc6-2KA的表达和纯化 | 第91-92页 |
| ·SsoCdc6-2KA蛋白基本生化性质的研究 | 第92-95页 |
| ·小结 | 第95-96页 |
| 4 总结与讨论 | 第96-102页 |
| ·总结 | 第96-97页 |
| ·古菌复制起始蛋白Orc1/Cdc6与原点DNA相互作用的特点 | 第97-98页 |
| ·细菌DnaA蛋白与原点DNA相互作用的特点及其与古菌的比较 | 第98页 |
| ·对古菌Cdc6蛋白与原点oriC相互作用的研究为真核生物的研 究提供了线索 | 第98-100页 |
| ·S.solfataricus第三个复制原点oriC3与先发现的两个原点oric1和 oriC2的比较 | 第100-101页 |
| ·下一步工作设想 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 附录 | 第118页 |
