| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述—猪体细胞克隆研究进展 | 第18-30页 |
| 1 国内外猪体细胞克隆技术研究的现状、水平 | 第18-21页 |
| 2 猪体细胞核移植的关键技术 | 第21-25页 |
| ·供体细胞的选择和处理 | 第21-22页 |
| ·供体细胞类型对猪体细胞核移植的影响 | 第21-22页 |
| ·体细胞周期同步化对猪体细胞核移植的影响 | 第22页 |
| ·受体细胞即卵母细胞的去核处理 | 第22-23页 |
| ·激活方法对猪重构胚的影响 | 第23-24页 |
| ·重构胚胎的培养移植以及受孕的诱导和维持 | 第24-25页 |
| 3 小结 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-30页 |
| 第二章 供核体细胞系的建立 | 第30-42页 |
| 1 材料与方法 | 第30-36页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·主要仪器耗材及试剂 | 第30-31页 |
| ·溶液配制 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-36页 |
| ·成年猪耳成纤维细胞系建立 | 第32-33页 |
| ·胎儿成纤维细胞系建立 | 第33页 |
| ·猪卵巢颗粒细胞系建立 | 第33-34页 |
| ·猪输卵管上皮细胞系建立 | 第34页 |
| ·细胞传代培养 | 第34页 |
| ·供体细胞液氮冷冻储存 | 第34-35页 |
| ·供体细胞的复苏 | 第35页 |
| ·细胞染色体计数分析 | 第35页 |
| ·细胞生长曲线 | 第35-36页 |
| ·供体细胞细胞周期同步化 | 第36页 |
| 2 结果 | 第36-39页 |
| ·猪各种类型细胞系的建立 | 第36-38页 |
| ·耳成纤维细胞系 | 第36-37页 |
| ·胎儿成纤维细胞系 | 第37页 |
| ·卵巢颗粒细胞系 | 第37页 |
| ·输卵管上皮细胞 | 第37-38页 |
| ·细胞活力检测 | 第38页 |
| ·胎儿成纤维细胞染色体数目 | 第38-39页 |
| ·胎儿成纤维细胞生长曲线 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-42页 |
| 第三章 转EGFP供核体细胞的制备 | 第42-51页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第42-43页 |
| ·溶液的配置 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌的质粒DNA转化 | 第44页 |
| ·质粒DNA快速小提 | 第44-45页 |
| ·pEGFP-c1的转染 | 第45页 |
| ·转染效率的检测 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-49页 |
| ·不同DNA浓度对转染效率的影响 | 第45页 |
| ·不同脂质体浓度对转染效率的影响 | 第45-46页 |
| ·DNA/脂质体复合物的暴露时间对转染效率的影响 | 第46-47页 |
| ·不同细胞汇合度对转染效率的影响 | 第47-49页 |
| 3 讨论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-51页 |
| 第四章 卵母细胞体外成熟及孤雌激活 | 第51-68页 |
| 1 材料与方法 | 第51-55页 |
| ·材料 | 第51-54页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第51-52页 |
| ·溶液的配置 | 第52-54页 |
| ·方法 | 第54-55页 |
| ·卵母细胞体外成熟 | 第54页 |
| ·卵母细胞孤雌激活 | 第54-55页 |
| 2 结果 | 第55-60页 |
| ·卵母细胞体外成熟 | 第55-57页 |
| ·不同培养液对卵母细胞体外成熟的影响 | 第55-56页 |
| ·PFF和FBS对卵母细胞体外成熟的影响 | 第56页 |
| ·EGF对卵母细胞体外成熟的影响 | 第56-57页 |
| ·卵母细胞孤雌激活 | 第57-60页 |
| ·不同电击参数与激活液对体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响 | 第57-58页 |
| ·电激活联合化学处理对体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响 | 第58页 |
| ·不同浓度与激活时间的离子霉素对体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响 | 第58-59页 |
| ·卵龄对体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响 | 第59页 |
| ·猪孤雌胚体外发育形态变化 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-66页 |
| ·卵母细胞体外成熟 | 第60-61页 |
| ·卵母细胞的孤雌激活 | 第61-66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 第五章 重构胚的构建及体外发育 | 第68-91页 |
| 1 材料与方法 | 第68-80页 |
| ·材料 | 第68-69页 |
| ·upgrade B2 INRA medium(Laboratoire C.C.D) | 第69页 |
| ·卵母细胞显微操作液 | 第69页 |
| ·仪器 | 第69页 |
| ·显微操作工具的制备 | 第69-75页 |
| ·制针前玻璃管处理 | 第69页 |
| ·显微操作去核 | 第69-71页 |
| ·显微操作固定针 | 第71-72页 |
| ·移卵/胚口吸管 | 第72页 |
| ·融合判定拨卵针 | 第72-75页 |
| ·实验方法 | 第75-79页 |
| ·卵母细胞体外成熟 | 第75页 |
| ·体细胞核移植 | 第75-79页 |
| ·供体细胞的制备 | 第75-76页 |
| ·受体卵母细胞去核 | 第76-78页 |
| ·去核卵母细胞的核移植 | 第78页 |
| ·融合与激活 | 第78-79页 |
| ·胚胎培养 | 第79页 |
| ·试验设计 | 第79-80页 |
| ·统计分析 | 第80页 |
| 2 结果 | 第80-83页 |
| ·不同来源供体细胞构建重构胚后期发育效果的比较 | 第80-81页 |
| ·不同传代次数的供体成纤维细胞对重构胚后期发育的影响 | 第81-82页 |
| ·不同去核方法对去核率与重构胚后期发育的影响 | 第82页 |
| ·融合参数对重构胚后期发育的影响 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-89页 |
| ·关于不同来源类型的供体细胞系 | 第83-84页 |
| ·不同传代次数的影响 | 第84-85页 |
| ·关于不同的去核方法 | 第85页 |
| ·不同培养体系 | 第85-89页 |
| 参考文献 | 第89-91页 |
| 第六章 猪体细胞克隆胚的胚胎移植 | 第91-100页 |
| 1 材料方法 | 第91-94页 |
| ·猪卵母细胞去核和去核卵母细胞移植 | 第91-92页 |
| ·胚胎移植 | 第92-93页 |
| ·受体母猪的选择 | 第92页 |
| ·受体母猪的发情控制 | 第92页 |
| ·胚胎移植过程 | 第92-93页 |
| ·受体母猪妊娠识别和维持 | 第93页 |
| ·克隆猪的鉴定 | 第93-94页 |
| 2 结果 | 第94-95页 |
| 3 讨论 | 第95-97页 |
| ·受体母猪的选择 | 第95-96页 |
| ·受体母猪卵巢的质量和生理状态对核移植胚受孕能力的影响 | 第96页 |
| ·移植月份的比较 | 第96页 |
| ·受体母猪的发情控制 | 第96-97页 |
| ·受体母猪妊娠识别和维持 | 第97页 |
| 4 小结 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-100页 |
| 全文结论 | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 附录Ⅰ 部分试剂配方 | 第104-108页 |
| 在读期间发表论文的情况 | 第108页 |
