| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 L-酪氨酸羟化酶 | 第16-18页 |
| 1.1.1 L-酪氨酸羟化酶的简介 | 第16页 |
| 1.1.2 L-酪氨酸羟化酶的反应机制 | 第16-18页 |
| 1.1.3 L-酪氨酸羟化酶的临床意义 | 第18页 |
| 1.2 类弹性蛋白 | 第18-20页 |
| 1.2.1 类弹性蛋白的简介 | 第18-19页 |
| 1.2.2 类弹性蛋白在生物医学中的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 内含肽 | 第20-23页 |
| 1.3.1 内含肽简介 | 第20-21页 |
| 1.3.2 内含肽剪接机制 | 第21-22页 |
| 1.3.3 内含肽在生物学上的应用 | 第22-23页 |
| 1.4 D氨基酸氧化酶 | 第23-25页 |
| 1.4.1 D氨基酸氧化酶的简介 | 第23-24页 |
| 1.4.2 D氨基酸氧化酶的催化机理 | 第24-25页 |
| 1.4.3 D氨基酸氧化酶的应用 | 第25页 |
| 1.5 课题研究意义及内容 | 第25-28页 |
| 第二章 HDP,HDP-ELP,Intein介导的HDP与DAAO共表达载体的构建 | 第28-52页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料与试剂 | 第28-32页 |
| 2.2.1 实验菌种与载体 | 第28-29页 |
| 2.2.2 引物设计的序列 | 第29页 |
| 2.2.3 试剂 | 第29-32页 |
| 2.3 pET28a-HDP载体构建简介 | 第32-33页 |
| 2.3.1 HDP基因的来源与合成 | 第32页 |
| 2.3.2 质粒的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.3 转化 | 第33页 |
| 2.4 pET28a-HDP-ELP载体构建简介 | 第33-34页 |
| 2.4.1 ELP基因的来源与合成 | 第33-34页 |
| 2.4.2 质粒的提取与转化 | 第34页 |
| 2.5 Intein介导的HDP与DAAO共表达载体的构建 | 第34-45页 |
| 2.5.1 融合基因片段I~C-DAAO的构建 | 第34-37页 |
| 2.5.2 pETDuet-I~C-DAAO载体的构建 | 第37-40页 |
| 2.5.3 融合基因片段HDP-I~N的构建 | 第40-43页 |
| 2.5.4 pETDuet-HDP-I~N-I~C-DAAO载体的构建 | 第43-45页 |
| 2.6 结果与分析 | 第45-51页 |
| 2.6.1 HDP与HDP-ELP质粒提取结果 | 第45页 |
| 2.6.2 Intein介导的HDP与DAAO共表达载体的构建结果 | 第45-51页 |
| 2.7 本章小结 | 第51-52页 |
| 第三章 HDP,HDP-ELP以及HDP-DAAO双酶体系的表达与纯化 | 第52-66页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 实验材料与试剂 | 第52-55页 |
| 3.2.1 实验菌种与载体 | 第52页 |
| 3.2.2 溶液配方 | 第52-53页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第53-54页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第54-55页 |
| 3.3 HDP的表达与纯化 | 第55-56页 |
| 3.3.1 HDP蛋白的预表达 | 第55-56页 |
| 3.3.2 HDP蛋白的放大培养 | 第56页 |
| 3.3.3 HDP蛋白的纯化 | 第56页 |
| 3.4 HDP-ELP的表达与纯化 | 第56-58页 |
| 3.4.1 HDP-ELP蛋白的预表达 | 第56-57页 |
| 3.4.2 HDP-ELP蛋白的放大培养 | 第57页 |
| 3.4.3 HDP-ELP蛋白的纯化 | 第57-58页 |
| 3.5 HDP-DAAO融合蛋白的表达与纯化 | 第58-59页 |
| 3.5.1 HDP-DAAO融合蛋白的预表达 | 第58页 |
| 3.5.2 HDP-DAAO融合蛋白的放大培养 | 第58页 |
| 3.5.3 HDP-DAAO融合蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| 3.6 结果与讨论 | 第59-64页 |
| 3.6.1 HDP与HDP-ELP蛋白的预表达 | 第59-60页 |
| 3.6.2 HDP-DAAO融合蛋白的预表达 | 第60-61页 |
| 3.6.3 HDP蛋白纯化结果 | 第61-62页 |
| 3.6.4 HDP-ELP蛋白纯化结果 | 第62-63页 |
| 3.6.5 HDP-DAAO融合蛋白纯化结果 | 第63-64页 |
| 3.7 本章小结 | 第64-66页 |
| 第四章 HDP,HDP-ELP以及HDP-DAAO双酶体系的活性表征 | 第66-82页 |
| 4.1 引言 | 第66页 |
| 4.2 实验材料与试剂 | 第66-67页 |
| 4.2.1 菌种及蛋白 | 第66-67页 |
| 4.2.2 主要试剂与溶液配方 | 第67页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第67页 |
| 4.3 HDP与HDP-ELP稳定性的比较 | 第67-69页 |
| 4.3.1 HDP与HDP-ELP溶解度的测定 | 第68页 |
| 4.3.2 HDP与HDP-ELP圆二色光谱的测定 | 第68-69页 |
| 4.4 HDP与HDP-ELP酶活的测定 | 第69-70页 |
| 4.4.1 标准曲线的测定 | 第69页 |
| 4.4.2 HDP与HDP-ELP活性的测定 | 第69-70页 |
| 4.4.3 HDP-ELP酶反应动力学的测定 | 第70页 |
| 4.4.4 HDP-ELP在不同pH/温度下的酶活测定 | 第70页 |
| 4.5 HDP-DAAO双酶体系的活性表征 | 第70-72页 |
| 4.5.1 HDP-DAAO融合蛋白活性的测定 | 第70-71页 |
| 4.5.2 HDP-DAAO融合蛋白酶中DAAO比活的测定 | 第71页 |
| 4.5.3 HDP-DAAO圆二光谱分析 | 第71-72页 |
| 4.5.4 HDP-DAAO荧光光谱分析 | 第72页 |
| 4.6 结果与讨论 | 第72-81页 |
| 4.6.1 HDP与HDP-ELP溶解度的比较 | 第72-74页 |
| 4.6.2 HDP与HDP-ELP圆二色光谱的测定 | 第74页 |
| 4.6.3 HDP与HDP-ELP酶活的比较 | 第74-76页 |
| 4.6.4 HDP-ELP的酶反应动力学结果 | 第76-77页 |
| 4.6.5 HDP-ELP在不同pH/温度下的酶活的变化情况 | 第77-78页 |
| 4.6.6 HDP-DAAO融合蛋白活性的测定 | 第78-79页 |
| 4.6.7 HDP-DAAO圆二光谱分析 | 第79-80页 |
| 4.6.8 HDP-DAAO荧光光谱分析 | 第80-81页 |
| 4.7 本章小结 | 第81-82页 |
| 第五章 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 研究成果及已发表的论文 | 第92-94页 |
| 导师及作者简介 | 第94-96页 |
| 附件 | 第96-97页 |
