| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-37页 |
| ·CoQ_(10)概述 | 第15-17页 |
| ·CoQ_(10)的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·CoQ_(10)的医学保健应用 | 第18-19页 |
| ·心血管疾病方面的应用 | 第18-19页 |
| ·协助治疗癌症 | 第19页 |
| ·CoQ_(10)在其它医学保健领域的应用 | 第19页 |
| ·CoQ_(10)生物合成代谢及遗传控制 | 第19-24页 |
| ·辅酶Q的生物合成途径 | 第19-22页 |
| ·生物代谢调控及角鲨烯合成酶SQS | 第22-24页 |
| ·RNA基因沉默技术 | 第24-28页 |
| ·RNAi的发现 | 第24-25页 |
| ·RNAi的分子机理 | 第25-27页 |
| ·RNAi技术的应用前景 | 第27-28页 |
| ·基因敲除技术 | 第28页 |
| ·真核模式生物粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe | 第28-31页 |
| ·Schizosaccharomyces pombe的系统分类地位和生活史 | 第28-30页 |
| ·Schizosaccharomyces pombe中的基因沉默 | 第30-31页 |
| ·微生物发酵法生产CoQ_(10)的研究进展 | 第31-36页 |
| ·CoQ_(10)不同生产方法的比较 | 第31-32页 |
| ·菌种诱变及工程菌的构建 | 第32-34页 |
| ·Co_(10)发酵生产条件的优化 | 第34-35页 |
| ·Co_(10)的分离纯化 | 第35-36页 |
| ·本文的研究内容 | 第36-37页 |
| 第二章 ERG9特异性siRHA真核表达载体及基因敲除表达框的构建 | 第37-61页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·ERG9 DNA序列及siRNA靶序列选择 | 第37-39页 |
| ·ERG9基因序列 | 第37-38页 |
| ·ERG9 siRNA靶序列选择 | 第38-39页 |
| ·ERG9翻译蛋白质序列 | 第39页 |
| ·siRNA寡核苷酸设计 | 第39-40页 |
| ·siRNA真核表达载体的构建 | 第40-50页 |
| ·菌株与载体 | 第40-42页 |
| ·工具酶与试剂 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·仪器设备 | 第44页 |
| ·mU6-ERG9siRNA特异性真核表达载体的构建 | 第44-48页 |
| ·siRNA特异性真核表达载体的构建策略优化 | 第48-50页 |
| ·pGEM-ERG9-zeo基因敲除表达框的构建 | 第50-53页 |
| ·ERG9酶基因的扩增 | 第50-51页 |
| ·重组质粒pGEM-ERG9-zeo-ERG9的构建 | 第51-53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-60页 |
| ·体内表达shRNA(短发夹RNA)的设计策略优化 | 第53-55页 |
| ·siRNA表达载体的构建策略优化 | 第55-57页 |
| ·双酶切琼脂糖凝胶电泳分析 | 第57-58页 |
| ·核苷酸序列测定分析 | 第58-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第三章 粟酒裂殖酵母发酵生产CoQ_(10)的优化 | 第61-79页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·菌种与培养基 | 第61页 |
| ·菌种 | 第61页 |
| ·主要培养基 | 第61页 |
| ·菌种选育 | 第61-63页 |
| ·菌种诱变流程 | 第62页 |
| ·紫外诱变 | 第62-63页 |
| ·不同参数下的培养优化试验 | 第63-64页 |
| ·C/N源优化实验 | 第63-64页 |
| ·温度调控实验 | 第64页 |
| ·前体物添加实验 | 第64页 |
| ·基因工程菌生长代谢实验 | 第64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-77页 |
| ·不同诱变剂量下细胞致死率及对CoQ_(10)产量的影响 | 第64-66页 |
| ·粟酒裂殖酵母生长及代谢曲线优化分析 | 第66-68页 |
| ·C、N源对菌体生长及CoQ_(10)产量的影响 | 第68-71页 |
| ·温度的代谢调控作用 | 第71页 |
| ·前体物质对羟基苯甲酸对产CoQ_(10)的影响 | 第71-72页 |
| ·Schizosaccharomyces pombe的zeocin耐受性研究 | 第72-73页 |
| ·粟酒裂殖酵母S.pombeERG9*突变株对产CoQ_(10)影响 | 第73-74页 |
| ·粟酒裂殖酵母S.pombeERG9*突变株生长及遗传稳定性研究 | 第74-76页 |
| ·基因沉默工程菌在发酵生产CoQ_(10)中的探索 | 第76-77页 |
| ·本章小结 | 第77-79页 |
| 第四章 辅酶Q_(10)提取工艺的研究 | 第79-89页 |
| ·引言 | 第79页 |
| ·细胞生物量的测定 | 第79页 |
| ·CoQ_(10)的定性定量检测分析 | 第79-80页 |
| ·CoQ_(10)的定性分析 | 第79-80页 |
| ·CoQ_(10)的定量检测 | 第80页 |
| ·细胞破碎方法的研究 | 第80-82页 |
| ·不同细胞破碎方法的比较 | 第81页 |
| ·液氮—丙酮研磨法 | 第81页 |
| ·BHT—丙酮研磨法 | 第81-82页 |
| ·菌体内CoQ_(10)提取方法的研究 | 第82-83页 |
| ·辅酶Q_(10)提取方法的选择 | 第82页 |
| ·醇碱皂化法 | 第82页 |
| ·碱皂化法 | 第82-83页 |
| ·溶剂萃取法 | 第83页 |
| ·结果与讨论 | 第83-87页 |
| ·抗氧化剂对CoQ_(10)提取的影响 | 第83-84页 |
| ·液态氮对CoQ_(10)提取的影响 | 第84页 |
| ·CoQ_(10)不同提取方法的比较 | 第84-85页 |
| ·酸-丙酮溶剂萃取对CoQ_(10)提取的影响 | 第85-87页 |
| ·本章小结 | 第87-89页 |
| 第五章 结论和展望 | 第89-91页 |
| ·结论 | 第89-90页 |
| ·展望与建议 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-95页 |
| 附录 | 第95-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第99-101页 |
| 作者和导师简介 | 第101-103页 |
| 北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第103-104页 |
