| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第10-21页 |
| ·引言 | 第10-11页 |
| ·几丁质酶研究进展 | 第11-18页 |
| ·微生物几丁质酶研究进展 | 第11-12页 |
| ·昆虫几丁质酶的研究进展 | 第12-16页 |
| ·几丁质酶的应用 | 第16-18页 |
| ·研究目的 | 第18页 |
| ·研究内容及技术路线 | 第18-21页 |
| ·研究内容 | 第18页 |
| ·技术路线 | 第18-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-43页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·供试昆虫 | 第21页 |
| ·菌株和载体 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要溶液配制 | 第23-24页 |
| ·东亚飞蝗中肠几丁质酶(LMCHI)基因的克隆及序列分析 | 第24-34页 |
| ·3’RACE 克隆LmChi 基因 | 第24-28页 |
| ·5’RACE 克隆LmChi 基因 | 第28-30页 |
| ·LmChi 基因的序列分析 | 第30-31页 |
| ·半定量RT-PCR 检测LmChi 基因的表达 | 第31-34页 |
| ·东亚飞蝗中肠几丁质酶(LMCHI)基因在酵母中的表达 | 第34-39页 |
| ·pPIC9K-LmChi 重组表达质粒的构建 | 第34-36页 |
| ·P.pastoris/ pPIC9K-LmChi 工程菌株的构建与筛选 | 第36-38页 |
| ·pPIC9K-LmChi 重组KM71 的表达 | 第38-39页 |
| ·绿僵菌几丁质酶(MACHI)基因的克隆及序列分析 | 第39-41页 |
| ·MaChi 基因同源片段的PCR 扩增、克隆及序列测定 | 第39-40页 |
| ·3’RACE 克隆MaChi 基因 | 第40页 |
| ·5’RACE 克隆MaChi 基因 | 第40-41页 |
| ·平板影印法筛选绿僵菌基因组文库 | 第41页 |
| ·MaChi 基因基因的序列分析 | 第41页 |
| ·绿僵菌几丁质酶(MACHI)基因在酵母中的表达 | 第41-43页 |
| ·pPIC9K-MaChi 重组表达质粒的构建 | 第41-42页 |
| ·P.pastoris/ pPIC9K-MaChi 工程菌株的构建与筛选 | 第42页 |
| ·pPIC9K-MaChi 重组KM71 的表达 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-57页 |
| ·东亚飞蝗中肠几丁质酶(LMCHI)基因的克隆与分析 | 第43-46页 |
| ·3’RACE 克隆LmChi 基因的3’端序列 | 第43-44页 |
| ·5’RACE 克隆LmChi 基因的5’端序列 | 第44页 |
| ·LmChi 基因的序列分析 | 第44-46页 |
| ·东亚飞蝗LmChi 基因的组织定位 | 第46页 |
| ·东亚飞蝗中肠几丁质酶(LMCHI)基因在酵母中的表达 | 第46-49页 |
| ·pPIC9K-LmChi 重组表达质粒的构建 | 第46-47页 |
| ·Pichia pastoris/ pPIC9K-LmChi 工程菌株的筛选 | 第47-48页 |
| ·重组东亚飞蝗几丁质酶蛋白的活性测定 | 第48-49页 |
| ·金龟子绿僵菌几丁质酶基因(MACHI)的克隆与分析 | 第49-54页 |
| ·MaChi 基因克隆的结果 | 第49-52页 |
| ·MaChi 基因的序列分析 | 第52-54页 |
| ·金龟子绿僵菌几丁质酶(MACHI)基因在酵母中的表达 | 第54-57页 |
| ·pPIC9K-MaChi 重组表达质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·Pichia pastoris/ pPIC9K-MaChi 工程菌株的筛选 | 第55-56页 |
| ·重组金龟子绿僵菌几丁质酶（MaChi）蛋白的活性测定 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| ·基因克隆 | 第57-58页 |
| ·东亚飞蝗中肠几丁质酶（LmChi）基因 | 第57页 |
| ·金龟子绿僵菌几丁质酶（MaChi）基因 | 第57-58页 |
| ·LMCHI 基因和MACHI 基因的毕赤酵母表达 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 5 结论及后续工作建议 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录 | 第67页 |
